Summary

Tilbakevendende Herpes stromal keratitt i Mus, en modell for å studere menneskelig HSK

Published: December 18, 2012
doi:

Summary

De fleste studier av postherpetisk hornhinnen sykdom bruke en primær infeksjon modell. Imidlertid ikke primær infeksjon med HSV-1 ikke vanligvis føre til sykdom hos mennesker. Her beskriver vi en tilbakevendende modell av postherpetisk hornhinnen sykdom, som mer etterligner menneskelig sykdom.

Abstract

Postherpetisk øyesykdom, kalt herpetic stromal keratitt (HSK), er en potensielt blindende infeksjon i hornhinnen som resulterer i over 300.000 kliniske besøk hvert år for behandling. Mellom 1 og 2 prosent av pasienter med klinisk sykdom vil oppleve tap av syn av den infiserte hornhinnen. De aller fleste av disse tilfellene er et resultat av reaktivering av en latent infeksjon av herpes simplex type I virus og ikke på grunn av akutt sykdom. Interessant, er akutt infeksjon modellen som oftest brukt til å studere denne sykdommen. Imidlertid ble det føltes som en tilbakevendende modell av HSK ville være mer reflekterende av hva som skjer under klinisk sykdom. De tilbakevendende dyremodeller for HSK har ansatt både kaniner og mus. Fordelen med kaniner er at de opplever reaktivering fra latency fraværende enhver kjent stimulans. Når det er sagt, er det vanskelig å utforske rollen som mange immunologiske faktorer spiller i tilbakevendende HSK fordi kanin modellen ikke har Immunological og genetiske ressurser at musen har. Vi valgte å bruke mus modell for tilbakevendende HSK fordi det har fordelen av at det er mange ressurser tilgjengelig, og også vi vet når reaktivering vil skje fordi reaktivering er indusert ved eksponering for UV-B lys. Hittil har denne modellen tillatt de laboratoriene bruke den til å definere flere immunologiske faktorer som er viktig for denne sykdommen. Det har også tillatt oss å teste både terapeutisk og vaksineeffekt.

Protocol

Animal Care Merk: Analgetika brukes ikke i denne modellen som de er anti-inflammatorisk og dermed ville oppheve modellen. 1. Utarbeidelse av virus Grow HSV-1 på Vero-celler (80% confluent) ved hjelp av en start fortynning på 0,01 mangfold av infeksjon (i T-150 kolbe, ca 5 x 10 5 plakk forming units) i 3-4 dager før alle cellene har rundet opp og er lett forskyves ved å treffe i kolben. Fjerne media til sterile sentrifugerør og sentrifugerør i Sorvall Legend…

Discussion

Den tilbakevendende modell av postherpetisk stromal keratitt (HSK) beskrevet her gjør etterforsker for å studere menneskelig HSK i en modell som er mer i samsvar med det som er observert under sykdom hos mennesker. Dermed modellens styrke er at sykdom oppstår i sammenheng med et immunsystem som allerede har ved stimulert under primær sykdom. Siden disse musene allerede har en immunrespons mot HSV-1, de faktorene som reaktiveres at immunrespons sannsynligvis forskjellig fra de som opprinnelig ble generert den. Derfor…

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Forfatterne ønsker å takke dr. Jay Pepose for å hjelpe lære modellen til oss. Dette arbeidet ble støttet av National Institutes of Health Grants EY11885 (PMS), EY21247 (PMS) og en ubegrenset tilskudd fra Research for å hindre blindhet til Institutt for Ophthalmology.

Materials

DMEM Sigma D5796
Fetal Bovine Serum Atlanta Biologicals S11150
Human Serum Sigma S7023
L-Glutamine Cellgro 25-005-C1
Pen/ Strep Sigma P4333
Fungizone Invitrogen 15290018
Centrifuge Sorvall Legend RT
Centrifuge Beckman 52-21
Transilluminatior UVP 95-0452-02
Sonicatior Branson Sonifier 450
Oak Ridge Tubes Nalgene Z 720410
Flasks- 7150 Corning 430823
Plates- 12 well Corning CLS 3513
Plates- 48 well Corning CLS 3548
Sterile Conical Tubes- 30 ml Corning CLS 430828
Sterile Cotton-tipped Applicators Fisher 23-400-125
30G Needles Becton-Dickinson 305106
25G Needles BD 305122
10 ml Syringe BD 309602
10 ml Syringe BD 309604

Referencias

  1. Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, B., Easty, D. An improved model of recurrent herpetic eye disease in mice. Curr. Eye Res. 8, 1193-1205 (1989).
  2. Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, W. A., Easty, D. L. Reactivation of latent infection and induction of recurrent herpetic eye disease in mice. J. Gen. Virol. 71, 397-404 (1990).
  3. Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, W. A., Easty, D. L. Passive immunization protects the mouse eye from damage after herpes simplex virus infection by limiting spread of virus in the nervous system. J. Gen. Virol. 71, 681-687 (1990).
  4. Laycock, K. A., Lee, S. F., Brady, R. H., Pepose, J. S. Characterization of a murine model of recurrent herpes simplex viral keratitis induced by ultraviolet B radiation. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 32, 2741-2746 (1991).
  5. Keadle, T. L., Stuart, P. M. IL-10 ameliorates corneal disease in a mouse model of recurrent herpetic keratitis. Microbial Path. 38, 13-21 (2005).
  6. Keadle, T. L., Laycock, K. A., Miller, J. K., Hook, K. K., Fenoglio, E. D., Francotte, M., Slaoui, M., Stuart, P. M., Pepose, J. S. Efficacy of a recombinant glycoprotein D subunit vaccine on the development of primary and recurrent ocular infection with herpes simplex virus type 1 in mice. J. Inf. Dis. 176, 331-338 (1997).
  7. Keadle, T. L., Laycock, K. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Proinflammatory cytokines IL-1 and TNF-a are required for recurrent herpetic keratitis in NIH mice. Invest. Ophth. Vis. Sci. 41, 96-102 (2000).
  8. Keadle, T. L., Usui, N., Laycock, K. A., Kumano, Y., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Corneal cytokine expression in a murine model recurrent herpetic stromal keratitis. Ocular Immunol. Inflam. 9, 193-205 (2001).
  9. Keadle, T. L., Morris, J. L., Pepose, J. S., Stuart, P. M. CD4+ and CD8+ cells are key participants in the development of recurrent herpetic stromal keratitis in mice. Microbial Path. 32, 255-262 (2002).
  10. Keadle, T. L., Morrison, L. A., Morris, J. L., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Therapeutic immunization with a virion host shutoff-defective, replication-incompetent herpes simplex virus type 1 strain limits recurrent herpetic ocular infection. J. Virol. 76, 3615-3625 (2002).
  11. Keadle, T. L., Laycock, K. A., Morris, J. L., Leib, D. A., Morrison, L. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Therapeutic vaccination with vhs(-) herpes simplex virus reduces the severity of recurrent herpetic stromal keratitis in mice. J. Gen. Virol. 83, 2361-2365 (2002).
  12. Keadle, T. L., Morris, J. L., Stuart, P. M. The effects of aminoguanidine on primary and recurrent ocular herpes simplex virus infection. Nitric Oxide. 13, 247-253 (2005).
  13. Stuart, P. M., Morris, J. E., Sidhu, M., Keadle, T. L. CCL3 protects mice from corneal pathology during recurrent HSV-1 infection. Front. Biosci. 13, 4407-4415 (2008).
  14. Keadle, T. L., Alexander, D. E., Leib, D. A., Stuart, P. M. Interferon gamma is not required for recurrent herpetic stromal keratitis. Virology. 380, 46-51 (2008).
  15. Carr, D. J., Austin, B. A., Halford, W. P., Stuart, P. M. Delivery of Interferon-gamma by an adenovirus vector blocks herpes simplex virus Type 1 reactivation in vitro and in vivo independent of RNase L and double-stranded RNA-dependent protein kinase pathways. J. Neuroimmunol. 206, 39-43 (2009).

Play Video

Citar este artículo
Morris, J., Stuart, P. M., Rogge, M., Potter, C., Gupta, N., Yin, X. Recurrent Herpetic Stromal Keratitis in Mice, a Model for Studying Human HSK. J. Vis. Exp. (70), e4276, doi:10.3791/4276 (2012).

View Video