Summary

Tilbagevendende Herpetisk stromal keratitis i Mus, en model for at studere menneskets HSK

Published: December 18, 2012
doi:

Summary

De fleste undersøgelser af herpetisk corneal disease anvende en primær infektion model. Imidlertid primær infektion med HSV-1 ikke fører typisk til human sygdom. Her beskriver vi en tilbagevendende model af herpes hornhinde sygdom, som i højere grad efterligner menneskelig sygdom.

Abstract

Herpetisk øjensygdom, betegnet herpetisk stromal keratitis (HSK), er en potentielt blændende infektion af hornhinden, som resulterer i over 300.000 kliniske besøg hvert år til behandling. Mellem 1 og 2 procent af patienter med klinisk sygdom vil opleve tab af synet af den inficerede hornhinde. Langt størstedelen af ​​disse tilfælde er resultatet af reaktivering af en latent infektion med herpes simplex type I virus og ikke på grund af akut sygdom. Interessant den akutte infektion er den model, der oftest bruges til at studere denne sygdom. Imidlertid blev det opfattelsen, at en tilbagevendende model af HSK ville være mere reflekterende af hvad der sker i løbet af klinisk sygdom. De tilbagevendende dyremodeller for HSK har ansat både kaniner og mus. Fordelen af ​​kaniner er, at de oplever reaktivering fra latens fraværende nogen kendt stimulus. Når det er sagt, er det vanskeligt at undersøge den rolle, som mange immunologiske faktorer spiller ved tilbagevendende HSK fordi kaninmodellen ikke har Immungiske og genetiske ressourcer, at musen har. Vi valgte at bruge musemodel for tilbagevendende HSK fordi den har den fordel, at der er mange midler til rådighed, og ved vi også, når reaktivering vil opstå, fordi reaktivering induceres ved eksponering for UV-B-lys. Indtil videre har denne model mulighed for disse laboratorier bruge det til at definere flere immunologiske faktorer, der er vigtige for denne sygdom. Det har også givet os mulighed for at teste både terapeutisk og vaccinens effekt.

Protocol

Animal Care Note: Analgetika anvendes ikke i denne model, som de er antiinflammatoriske og vil således medføre, at modellen. 1. Fremstilling af virus Grow HSV-1 på Vero-celler (80% konfluente) under anvendelse af et udgangsmateriale fortynding af 0,01 infektionsmultiplicitet (i T-150-kolbe, ca 5 x 10 5 plaquedannende enheder) i 3-4 dage indtil alle celler har afrundede op og er nemt forrykke ved at ramme kolben. Fjern medier til sterile centrifugerør og centr…

Discussion

Den tilbagevendende model af herpetisk stromal keratitis (HSK) beskrevet her giver investigator at studere menneskelig HSK i en model, der er mere i overensstemmelse med det, der er observeret under sygdom hos mennesker. Således er modellens styrke er, at sygdom opstår i forbindelse med et immunsystem, der allerede ved stimuleret under primær sygdom. Da disse mus allerede en immunreaktion mod HSV-1, de faktorer, der reaktivere at immunresponset sandsynligvis forskellige fra dem, der oprindeligt frembragt den. Derfor …

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Forfatterne vil gerne takke Dr. Jay Pepose for at hjælpe undervise model til os. Dette arbejde blev støttet af National Institutes of Health Tilskud EY11885 (PMS), EY21247 (PMS) og en ubegrænset bevilling fra Forsknings at forebygge blindhed til Department of Ophthalmology.

Materials

DMEM Sigma D5796
Fetal Bovine Serum Atlanta Biologicals S11150
Human Serum Sigma S7023
L-Glutamine Cellgro 25-005-C1
Pen/ Strep Sigma P4333
Fungizone Invitrogen 15290018
Centrifuge Sorvall Legend RT
Centrifuge Beckman 52-21
Transilluminatior UVP 95-0452-02
Sonicatior Branson Sonifier 450
Oak Ridge Tubes Nalgene Z 720410
Flasks- 7150 Corning 430823
Plates- 12 well Corning CLS 3513
Plates- 48 well Corning CLS 3548
Sterile Conical Tubes- 30 ml Corning CLS 430828
Sterile Cotton-tipped Applicators Fisher 23-400-125
30G Needles Becton-Dickinson 305106
25G Needles BD 305122
10 ml Syringe BD 309602
10 ml Syringe BD 309604

Referencias

  1. Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, B., Easty, D. An improved model of recurrent herpetic eye disease in mice. Curr. Eye Res. 8, 1193-1205 (1989).
  2. Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, W. A., Easty, D. L. Reactivation of latent infection and induction of recurrent herpetic eye disease in mice. J. Gen. Virol. 71, 397-404 (1990).
  3. Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, W. A., Easty, D. L. Passive immunization protects the mouse eye from damage after herpes simplex virus infection by limiting spread of virus in the nervous system. J. Gen. Virol. 71, 681-687 (1990).
  4. Laycock, K. A., Lee, S. F., Brady, R. H., Pepose, J. S. Characterization of a murine model of recurrent herpes simplex viral keratitis induced by ultraviolet B radiation. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 32, 2741-2746 (1991).
  5. Keadle, T. L., Stuart, P. M. IL-10 ameliorates corneal disease in a mouse model of recurrent herpetic keratitis. Microbial Path. 38, 13-21 (2005).
  6. Keadle, T. L., Laycock, K. A., Miller, J. K., Hook, K. K., Fenoglio, E. D., Francotte, M., Slaoui, M., Stuart, P. M., Pepose, J. S. Efficacy of a recombinant glycoprotein D subunit vaccine on the development of primary and recurrent ocular infection with herpes simplex virus type 1 in mice. J. Inf. Dis. 176, 331-338 (1997).
  7. Keadle, T. L., Laycock, K. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Proinflammatory cytokines IL-1 and TNF-a are required for recurrent herpetic keratitis in NIH mice. Invest. Ophth. Vis. Sci. 41, 96-102 (2000).
  8. Keadle, T. L., Usui, N., Laycock, K. A., Kumano, Y., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Corneal cytokine expression in a murine model recurrent herpetic stromal keratitis. Ocular Immunol. Inflam. 9, 193-205 (2001).
  9. Keadle, T. L., Morris, J. L., Pepose, J. S., Stuart, P. M. CD4+ and CD8+ cells are key participants in the development of recurrent herpetic stromal keratitis in mice. Microbial Path. 32, 255-262 (2002).
  10. Keadle, T. L., Morrison, L. A., Morris, J. L., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Therapeutic immunization with a virion host shutoff-defective, replication-incompetent herpes simplex virus type 1 strain limits recurrent herpetic ocular infection. J. Virol. 76, 3615-3625 (2002).
  11. Keadle, T. L., Laycock, K. A., Morris, J. L., Leib, D. A., Morrison, L. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Therapeutic vaccination with vhs(-) herpes simplex virus reduces the severity of recurrent herpetic stromal keratitis in mice. J. Gen. Virol. 83, 2361-2365 (2002).
  12. Keadle, T. L., Morris, J. L., Stuart, P. M. The effects of aminoguanidine on primary and recurrent ocular herpes simplex virus infection. Nitric Oxide. 13, 247-253 (2005).
  13. Stuart, P. M., Morris, J. E., Sidhu, M., Keadle, T. L. CCL3 protects mice from corneal pathology during recurrent HSV-1 infection. Front. Biosci. 13, 4407-4415 (2008).
  14. Keadle, T. L., Alexander, D. E., Leib, D. A., Stuart, P. M. Interferon gamma is not required for recurrent herpetic stromal keratitis. Virology. 380, 46-51 (2008).
  15. Carr, D. J., Austin, B. A., Halford, W. P., Stuart, P. M. Delivery of Interferon-gamma by an adenovirus vector blocks herpes simplex virus Type 1 reactivation in vitro and in vivo independent of RNase L and double-stranded RNA-dependent protein kinase pathways. J. Neuroimmunol. 206, 39-43 (2009).

Play Video

Citar este artículo
Morris, J., Stuart, P. M., Rogge, M., Potter, C., Gupta, N., Yin, X. Recurrent Herpetic Stromal Keratitis in Mice, a Model for Studying Human HSK. J. Vis. Exp. (70), e4276, doi:10.3791/4276 (2012).

View Video