טיפול קבוע ותחזוקה של דג זברה (<em> Danio rerio</em>) מעבדה: מבוא
Summary
פרוטוקול זה מתאר תחזוקה וטיפול קבוע כדי לשמור על תנאים אופטימליים לגידול בעלי דג זברה. הסרטון מדגים את הפרוטוקול לתחזוקת מערכת, דיור רגיל, הזנה, רבייה, וגידול של זחלי דג זברה.
Abstract
פרוטוקול זה מתאר טיפול ותחזוקה שוטף של מעבדת דג זברה. דג זברה עכשיו צובר פופולרי בגנטיקה, מחקר תרופתי והתנהגותי. כחוליות, דמיון דג זברת חלק ניכר גנטי רצף עם בני אדם ונמצא בשימוש כמודל חיה לתנאי מחלה אנושי שונה. היתרונות של דג זברה בהשוואה לדגמי החולייתנים נפוצים אחרים כוללים פוריות גבוהה, עלות תחזוקה נמוכה, עוברים שקופים, והתפתחות מהירה. בשל ההחלטה של עניין במחקר דג זברה, בצורך להקים ולתחזק מתקן דיור דג זברה פורה הוא גם גדל. למרות שהספרות זמינה עבור התחזוקה של מעבדת דג זברה, פרוטוקול וידאו מתומצת חסר. סרטון זה מדגים את הפרוטוקול לדיור קבוע, האכלה, ריבוי וגידול של זחלי דג זברה. תהליך זה יסייע לחוקרים להבין את התנאים אופטימליים והתנהגות הטבעית של zebrafisח גידול בעלי ומכאן לפתור בעיות ניסיוניות שמקורן בתנאי הגידול בעלי הדגים. פרוטוקול זה יהיה לעזר עצום לחוקרים מתכננים להקים מעבדת דג זברה, וגם לתלמידים תארים מתקדמים המתעתדים להשתמש בדג זברה כמודל חיה.
Protocol
Representative Results
Discussion
דג זברת מקורן נהר הגנגס בצפון הודו והופכים פופולריים במחקר בשניהם בוגרים ושלבי זחל 2, נסקר על ידי ספנס et al. 3. דג זברה יש מספר יתרונות על פני מודלים של בעלי חיים אחרים כגון פוריות גבוהה, קלות התחזוקה, פינוי אופטי של עוברים, התפתחות עוברית מהירה, ועלות תחזוקה נמוכה. הם ניתנים למניפולציה גנטית 6 ומתאימים לסריקת תרופות תפוקה גבוהה 4,5. ההפריה שלהם היא חיצונית וזה יתרון עבור השימוש בם על ידי ביולוגים התפתחותיים. בשל תכונותיו החיוביות אלה, דג הזברה צובר פופולרי ב7 גנטיקה, תרופתי 8, ומחקר התנהגותי 9,10. יש מספר האתגרים לשמירה על מתקן דג זברה וגידול בעלי דג זברה להשיג עוברים. בזאת, אנו מתארים חוויות וההמלצות שלנו בהתמודדות עם אתגרים אלה וoutline פרוטוקול לתחזוקת מערכת, האכלה, ריבוי וגידול של הזחלים.
תחזוקת מערכת
כדי לשמור על דג זברה במצב בריא, חשוב לספק להם סביבה נקיה במערכת האקווריום מתפקד כראוי. חלק חשוב בזה משתנה מסנני מערכת באופן קבוע, כך שכל הטנקים יקבלו זרימת מים תקינות ומים נקיים. זה חיוני כדי למנוע כשל באספקת מי הרכיבה על האופניים לכל טנק עקב צינורות מערכת חסומה. הצינורות ניתן לנקות באמצעות לחץ מים גבוהה מרגיל וזרימה אם חסימה מתרחשת. באופן אידיאלי, בסביבות 10% מהמים של המערכת צריכים להיות מוחלפים מדי יום כדי לשמור על איכות מים טובה. לחלופין, ניתן להחליף מים בעת החלפת המכל או מסנן פחם. הדבר מבטיח כי הלכלוך הופקד בצינורות המחברים מסננים אלה הוסר. איכות מים צריכה להיבדק על בסיס קבוע. פרמטרים כגון האלקליניות, pH, temperatיור, קשיות, אמוניה, חמצן מומס, מליחות, ומוליכות צריך להיחשב כגורמים חשובים בייצוג איכות מי המערכת (ראה טבלה 2 לפרטים נוספים). בחנק הפחות, pH וטמפרטורה צריכה להיות במעקב על בסיס קבוע על מנת להבטיח את איכות מים טובה לדג זברת דיור. האידיאלי ניטראט (NO 3 -) רמות <50 מ"ג / 11 ליטר, ואם אלה הרמות גבוהות יכולות להיות מופחתות על ידי החלפת המים במערכת מסתובבת עם מערכת מים הטריים. לעתים, מסננים לא מתאימים היטב ולדלוף ולכן מומלץ לבדוק כל דליפות לאחר שינוי מסנן. אם זרימת המים מהמאגר הראשי חסומה גם לאחר שינוי משאבת מים או שינוי מסנן, זרימת המים יכולה להיות משוחזרת על ידי מי מהתרופפות או סר של המסנן לכמה שניות כדי לשחרר את כל ואקום שנוצר בצינורות. הזמן הדרוש כדי לשנות מסננים יכול להשתנות בהתאם לגורמים שונים כגון סך העומס o הביולוגיתn המערכת, הניקיון של מסננים אחרים, והלכלוך שהופקדו בצינורות. לפיכך, מסננים צריכים מייד להיות שונים אם הם מופיעים מלוכלכים או אם כל הטנקים לא מקבלים אספקת המים הנכונה. מומלץ גם שרשת הדגים לנקות עם אתנול 70%, ונשטפה במים כדי לטהר אותו, ולהתייבש לפני שימוש מחדש. ייבוש מבטיח אידוי של אתנול שאחרת הוא רעיל לדגים.
רוב מערכות דג הזברה להשתמש דה כלור מים ברז, ואולם, חלק ממערכות משתמשות במי deionized. זה חשוב לשמור על המוליכות של מי המערכה בין 300 ל ~ 1,500 μS כזה מקטין את אנרגית הדגים צריכים לשמור על מלחים בגוף. לכן, דג זברה לא יכול להיות כל זמן במים, אלא אם כן deionised מלחים נוספים כדי לשמור על רמת המוליכות האופטימלית. קיים סיכון של ריכוזי נחושת גבוהים אפשריים במי המערכת אם מי ברז משמש כי מסנן הפחם אינו מסיר את הנחושת. לכן, uSERS צריך לבדוק לריכוזי נחושת ולהימנע מנחושת הצנרת במידת ההאפשר.
האכלה
דג הזברה לא צריך להיות יתר על מידה כמו זה עלול להגביר את רמת ההחנקות במים, ואולי להשפיע על הרבייה שלהם 11, או הכדאיות, כמו כמה דגים עלולים למות כתוצאה מאכילת יתר. אנו ממליצים לא לספק יותר מזון במהלך כל האכלה מטנק של דגים יכולים לסיים תוך 10 דקות. חשוב מאוד להסיר מלח משרימפס המלח לפני שהאכיל אותם לדג הזברה כריכוז עודף מלח גורם למוות. אם יותר ביצי דג זברה נדרשות, דגים ניתן לאכול שלוש פעמים ביום. ניקוי מכלי דגי המגדל יומי גם משפר את רמות ייצור ביצים.
כאשר האכלה על מערכות בתי גידול המימיות אנחנו בדרך כלל לכבות את משאבת מים ומשאבת אוויר כדי לאפשר לדגים לאכול את האוכל למשך 10 דקות. זה מקטין את כמות המזון שנשטפה למסננים. עם זאת, משתמשים חייבים להיות זהירים כדי remגחלת להפעיל משאבות אלה שוב לאחר מכן.
רבייה
דג זברה הוא בדרך כלל בתנאי הרבייה אופטימלי בין ~ 3 וגיל 18 חודשים. רביית Pairwise לא צריכה להתבצע במשך 11 ימים רצופים, אולם גידול בטנקים ניתן לבצע מדי יום כטנק יכול להחזיק דגים רבים המקטינים את הסיכויים של אותו הזוג של דגים שגדלו במשך ימים ברציפות. גידול צריך להתבצע במרווחי זמן קבועים, גם אם ביצים אינן נדרשות. תהליך זה יבטיח את מחזור הרבייה של הדג נשמר. מומלץ כי יש יותר נשים מאשר גברים ברביית הגדרה. דג זברת זכר לשנות בנות זוגם על בסיס יומי 12 נוספים אשר תומכות בהמלצה זו. יתר על כן, בתוך המעבדה שלנו אנחנו בתחילה חווינו בעיות עם רבייה, לעומת זאת, משתמשים יותר נקבות מזכרים ברביית הגדרה עזרה לפתור את הבעיה. יתר על כן, האכלה עם חלבון גבוהה קונטהnt דיאטה וארטמיה 2-3 פעמים ביום, דגי ערבוב מטנקים שונים (מהורים שונים), שמירה על הטמפרטורה של רביית הגדרה בין 27 ל 28 מעלות צלזיוס, ולוחץ את הבטן של נקבות עם צינורות שחלה חסומה באמצעות עיסוי עדין השתפר ייצור ביצים נוספות. אנו ממליצים לשמור על שיא של קווי דגים / מקורות, כדי למנוע ברבייה בין אחים. עוד דבר זה משפר את ייצור עובר. שמירה על שיא של מספר העוברים שנקבעו על ידי דגים מכל טנק גם מומלץ. זה מסייע בשמירה על מסלול של טנקי דגים הטובים הרבייה ונקיטת אמצעים לשיפור רבייה בדגים לא יטילו ביצים.
גיוס של זחלים
האכלה של זחלים צריכה להתחיל מ 5 DPF (ימי הפרית הודעה). זחלים צעירים ניתן להאכיל במזון יבש של ~ 100 מיקרון בגודל (למשל, ZM100) או מזון חי כגון הסנדלית וrotifers (אשר ממריץ צמיחה). גודל האוכל לאט ניתן להגדילל200 מיקרון (למשל ZM200) או מיקרון 300/400 (למשל ZM300). אוכלוסייה של דגים בוגרים צריכה להיות בסביבות 6-7 דגים לליטר מים. תרגול זה מומלץ לתחזוקה טובה יותר של BOD (צריכת חמצן ביולוגית) לטנקים.
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המחברים מבקשים להודות לתמי Esmaili על סיועה בניהול של חומרים מתכלה במעבדה. AA הוא מקבל מלגת דוקטורט מהמרכז למצוינות לחקר מחלת אלצהיימר והטיפוח, בית הספר למדעי רפואה, אוניברסיטת אדית קוואן. MC מקבל תמיכה במימון תואר דוקטור ממועדון רוטרי, פרת'. בבוקר, GV, KT, וRNM ממומנים על ידי קרן המחקר של McCusker אלצהיימר.
Materials
| Name of reagent/equipment | Company | Catalogue number | |
| Zebrafish circulating system | Aquatic Habitats, USA | AHAB stand-alone, bench-top systems | |
| Sodium Bicarbonate | Sigma Aldrich | S6297 | |
| Fish food dispenser/Dry food feeder | Aquatic Habitats, USA | AH19 | |
| Microscope | Olympus | SZX12 | |
| Dry Food | ZM Fish food, UK | ZM100, ZM200, ZM300 | |
| Brine shrimp eggs | Salt Creek, Inc., USA | Premium Grade | |
| In-tank breeders | Aquatic Habitats, USA | ITSTS-A | |
| Activated carbon | Penn-Plax Pro-crab, USA | PBC3MF | |
| Breeding tanks | Aquatic Habitats, USA | SBTANK (1L) Breeder Tank-2 (2L) |
|
| Red sea salt | Red sea salt, USA | Local pet store/ www.redseafish.com |
|
| Filters (Canister, filter pads, and UV) | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
| Siporax Media | Aquatic Habitats, USA | BF 820 | |
| Brine shrimp net | Aquatic Habitats, USA | BSN 1 | |
| Brine shrimp hatcher | Aquatic Habitats, USA | BS252 | |
| Baffles | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
| Table 1. Table of specific reagents and equipment used in this protocol. |
Referencias
- Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. Stages of embryonic development of the zebrafish. Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).
- Avdesh, A., et al. Evaluation of color preference in zebrafish for learning and memory. J. Alzheimers Dis. 28, 459-469 (2012).
- Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio. Biol. Rev. Camb. Philos. Soc. 83, 13-34 (2008).
- Best, J. D., et al. Non-associative learning in larval zebrafish. Neuropsychopharmacology. 33, 1206-1215 (2008).
- Wolman, M. A., Jain, R. A., Liss, L., Granato, M. Chemical modulation of memory formation in larval zebrafish. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 15468-15473 (2011).
- Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function. J. Vis. Exp. (25), e1115 (2009).
- Gerlai, R. Zebra fish: an uncharted behavior genetic model. Behav. Genet. 33, 461-468 (2003).
- Eddins, D., Petro, A., Williams, P., Cerutti, D. T., Levin, E. D. Nicotine effects on learning in zebrafish: the role of dopaminergic systems. Psychopharmacology. (Berl). 202, 103-109 (2009).
- Colwill, R. M., Raymond, M. P., Ferreira, L., Escudero, H. Visual discrimination learning in zebrafish (Danio rerio. Behav. Processes. 70, 19-31 (2005).
- Blaser, R. E., Chadwick, L., McGinnis, G. C. Behavioral measures of anxiety in zebrafish (Danio rerio). Behav. Brain Res. 208, 56-62 (2010).
- Westerfield, M. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). THE ZEBRAFISH BOOK. , (2007).
- Delaney, M., et al. Social interaction and distribution of female zebrafish (Danio rerio) in a large aquarium. Biol. Bull. 203, 240-241 (2002).
