荧光激活细胞分选（FACS）自主神经祖细胞的分离，从胎鼠的内脏器官的优化程序

在开发过程中，神经嵴（数控）的神经祖细胞迁移的神经管形成自主神经节，内脏器官，如小肠和下尿路。在开发过程中，这些细胞在成熟组织往往分散的整个组织，因此，使用激光捕获微解剖的方法离散人群的隔离是很难的。不过，他们可以直接可视化，如酪氨酸羟化酶（TH）神经元特异性基因的调控区域驱动的荧光记者表达。我们描述了产量高，可行的TH +神经祖细胞从胎鼠内脏组织，包括肠道和泌尿生殖道（LUT），基于分离和荧光激活细胞分选（FACS）进行了优化的方法。

TH基因编码的限速酶生产儿茶酚胺。肠道神经祖细胞开始表达TH期间ING在胎儿小肠¹和TH他们迁移也是目前在成人骨盆神经节神经元^2-4的一个子集。首次亮相的血统和这些神经元在其他方面的LUT，其隔离的分布尚未描述。神经祖细胞表达TH，可以很容易地可视化表达绿色荧光蛋白在小鼠携带的基因结构的Tg（TH-EGFP）DJ76Gsat/Mmnc ^1。我们在小鼠胚胎成像这个基因的表达，以文件的发展中国家的LUT 15.5天后性交（DPC）的TH的分布+细胞，划定为0.5 DPC上午插件检测，并观察到的凝聚神经祖细胞的一个子集盆腔神经节表达EGFP的。

到隔离LUT的TH +神经元祖细胞，我们优化的方法，最初用来净化神经嵴干细胞从胎鼠小肠^2-6。在此之前的努力隔离NC-派生的人口依靠鸡尾酒用胶原酶和胰蛋白酶消化获得细胞悬液，流式细胞仪。在我们的手中，这些方法产生的细胞悬液，从相对较低的可行性LUT。由于胎儿的LUT组织的神经祖细胞的发病率已经很低，我们成立了优化分离方法等，将增加在最终分解细胞生存。我们决心在Accumax温柔分离（创新的细胞技术公司），手动过滤，流量在低压力，使我们能够实现一贯更大的生存（细胞总数的70％），随后产量足够的神经祖细胞下游分析排序。我们所描述的方法，可以广泛应用于多种神经元的人口，无论从胎儿或成年小鼠组织隔离。