妊娠中期のマウス胚の低菱形リップの in vitroエレクトロポレーションで

菱形の唇は神経管と第四脳室^（1日）のroofplate間の接合部における後脳に位置して胚の神経上皮である。菱形リップはrhombomere 1（R1）を包含し、小脳の神経細胞と神経細胞の多様な脳幹系統^2-4を生じさせる下菱形リップ（LRL）を生成し、上部菱形リップ（URL）に細分することができます。 LRL誘導体は、聴覚蝸牛神経核の神経細胞のバランスとモータ制御^5-8制御に関与しているprecerebellar核のものが含まれています。 LRLから神経新生は、胚日（E）9.5から16.5 ^{5、9を含む}大規模な一時的なウィンドウの上に発生します。別の神経系統は、この神経ウィンドウの間に明確な発達日間分裂細胞（または生まれている）のようなLRLから出てくる。

遺伝子発現コンストラクトのエレクトロポレーションに使用することができLRL前駆細胞における遺伝子発現を操作し、潜在的にこの地域の^10月12日から生産ニューロンの運命を変更することができます。胎生12.5日以降^{10日12月14日}に生まれた系統を操作するための非常に成功しました。 子宮内エレクトロポで前のE12.5に子宮内エレクトロポレーションで経由してマウスのLRL前駆細胞の遺伝子発現を変更すると、ために主に成功していない致死率は、第四脳室のroofplate、LRLにエレクトロされて​​いる外因性DNAを提供する上で必要なステップを穿刺に関連付けられています。しかし、多くのLRL派生した系統は、以前のE12.5 ⁹よりLRLから生じる。これらの以前の生まれの系統は横網を構成するニューロンは、外部楔状束、小脳⁵に脊髄および大脳皮質からの入力を接続する機能precerebellarシステムの下オリーブ核が含まれています。 LRLの式を操作するためにE12.5未満の胚から、我々は、胚をエレクトロポレーション後に文化に置かれているのin vitroシステムを開発しました。

本研究では、E11.5でLRL前駆細胞の遺伝子発現を操作するための効率的かつ効果的な手法を提案する。広くアクティブなCAGプロモーターから駆動される緑色蛍光タンパク質（GFP）でエレクトロ胚は、再現性の文化の24時間後にGFPを発現した。このアッセイの重要な側面だけのため外来遺伝子の発現しないため、エレクトロポレーションおよび培養技術から、その結果二次的効果の変更されている遺伝子発現されています。それは、内在性遺伝子の発現パターンがエレクトロポレーションおよび培養胚で邪魔されずに残っていることが判明した。このアッセイは、過剰発現用プラスミドの導入によりE12.5より若い胚のLRLから出てきた細胞の運命を変更したり、の（RNAiを介して）をノックダウンするために利用することができる別のプロ神経転写因子。