Murin benmärgstransplantation är en allmänt använd teknik för att studera immunologiska mekanismer som styr transplantat-mot-värd-sjukdom hos människor. Förmågan att övervaka T-cell mönster människohandel<em> In vivo</em> Möjliggör detaljerad analys av utvecklingen och bevarandet av T-cell svar under graft-versus-host sjukdom.
Graft-versus-värd-sjukdom (GVHD) är den begränsande hinder för den breda användningen av benmärgstransplantation som en botande terapi för en mängd hematologiska brister. GVHD orsakas av mogna alloreaktiva T-celler närvarande i benmärgen transplantat som infunderas i mottagaren och orsakar skador på organ värd. Emellertid, i möss, måste T-celler till benmärgen inokulum att orsaka GVHD. Även omfattande arbete har gjorts för att karakterisera T-cell svar efter transplantation är bioluminescent bildteknik en icke-invasiv metod för att övervaka T mönster cell handel in vivo.
Efter dödlig bestrålning, är mottagande möss transplanteras med benmärgsceller och splenocyter från donatormöss. T-cell-undergrupper från L2G85.B6 (transgena möss som konstitutivt uttrycker luciferas) ingår i transplantatet. Genom att bara transplantera vissa T-cell undergrupper är en möjlighet att spåra specifika T-celler undergrupper in vivo,och baserat på deras placering, utveckla hypoteser om betydelsen av specifika T-cell undergrupper för att främja GVHD vid olika tidpunkter. Vid förutbestämda intervaller efter transplantation är mottagande möss avbildas med en Xenogen IVIS CCD-kamera. Ljusintensiteten kan kvantifieras med hjälp av programvara Living Image för att generera en pseudo-färgbild baserad på foton intensitet (röd = hög intensitet, violett = låg intensitet).
Mellan 4-7 dagar efter transplantationen, mottagande möss börja visa kliniska tecken på GVHD. Cooke et al. 1 utvecklat ett poängsystem för att kvantifiera sjukdomsprogression baserat på mottagaren möss päls textur, hud integritet, aktivitet, viktminskning, och kroppshållning. Möss gjorde dagligen och avlivades när de blir döende. Mottagare möss blivit allmänt döende 20-30 dagar efter transplantationen.
Musmodeller är värdefulla verktyg för att studera immunologi GVHD. Selektivt transplantera synnerhet T-cell undergrupper albottenrekord för noggrann identifiering av rollerna varje delmängd spelar. Icke-invasivt spåra T-cellsvar in vivo lägger ytterligare ett lager av värde för murina GVHD modeller.
Protokollet för att inducera GVHD i möss som presenteras här är en kliniskt relevant modell för murin GVHD. Ursprungligen fastställts av Berger et al. Under 1994, är det C57BL / 6 till BALB.B stam kombination av MHC-matchas med GVHD dödlighet förmedlas av CD4-beroende, CD8 T effektorer 2, mycket liknande den vanligaste kliniska scenariot 3. Det är känt att transplantera CD8 T-celler enbart inte orsakar GVHD i denna modell, men är sjukdomsprogression betydligt sämre när både …
The authors have nothing to disclose.
Vi står i tacksamhetsskuld till Alice Gaughan och Jiao-Jing Wang, vars enastående teknisk support, intellektuella insatser och moraliskt stöd bidrog flytta dessa studier framåt. Dessa studier stöddes av NIH bidrag AI036532 till GAH.
Name of Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
RPMI 1640 | Invitrogen | 12633-012 | |
Fetal Calf Serum | Invitrogen | 10439016 | |
40 μM Cell Strainer | BD Biosciences | 352340 | |
CD3e-Biotin | Miltenyi Biotech | 130-093-021 | |
Anti-Biotin Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-091-147 | |
CD8a Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-049-401 | Used to deplete CD8 T cells from spleen. |
CD8a Purification Antibody Cocktail | Miltenyi Biotech | 130-095-236 | Used to purify CD8 T cells from spleen. |
D-Luciferin | Caliper Life Sciences | 122796 |