In diesem Video Artikel beschreiben wir die Verwendung eines neuen<em> Ex vivo</em> Modell der akuten Herpes-simplex-Virus Typ I Hornhautepithels Infektion.
Herpes-Keratitis ist einer der schwerwiegendsten Pathologien, die mit dem Herpes-simplex-Virus-Typ 1 (HSV-1) zugeordnet ist. Herpes Keratitis ist derzeit die führende Ursache von sowohl Hornhaut abgeleitet und Infektion verbundene Blindheit in der entwickelten Welt. Typische Präsentation von Herpes-Keratitis umfasst Infektion der Hornhautepithel und manchmal die tiefere Hornhautstroma und Endothel, was zu solchen dauerhaften Hornhaut Pathologien als Narbenbildung, Ausdünnung, und Opazität ein.
Kornealen HSV-1 Infektion ist traditionell in zwei Typen von experimentellen Modellen untersucht. Die in vitro-Modell, in dem kultivierten Monolayer von Hornhautepithelzellen in einer Petrischale infiziert sind, bietet Einfachheit, hohe Reproduzierbarkeit und schnelle Experimente und relativ niedrigen Kosten. Auf der anderen Seite bietet das in vivo Modell, in dem Tiere wie Kaninchen oder Mäuse direkt in der Hornhaut geimpft, eine hochentwickelte physiologischeSystem, hat aber höhere Kosten, längere Experimenten tierischen notwendigen Sorgfalt und einen größeren Grad an Variabilität.
In diesem Video Artikel stellen wir eine detaillierte Demonstration einer neuen ex vivo Modell der Hornhautepithels HSV-1-Infektion, das die Stärken sowohl der in vitro und in vivo Modellen kombiniert. Die ex vivo-Modell nutzt intakten Hornhaut organotypically in Kultur gehalten und infiziert mit HSV-1. Die Verwendung des ex vivo-Modell ermöglicht eine hohe physiologische Basis Schlussfolgerungen, doch ist es sehr preiswert und erfordert Zeitaufwand vergleichbar mit der in vitro-Modell.
In diesem Video Artikel beschreiben wir ein Verfahren zur Untersuchung akuter Hornhautepithels HSV-1-Infektion in einem ex vivo-Modell. Dieses Modell ist ein nützliches Sprungbrett zwischen den in vitro und in vivo Modellen, weil es für physiologisch genaue Validierung der Zellkultur Ergebnisse ermöglicht und dadurch begrenzt die Menge von Tierversuchen, die durchgeführt werden müssen. Zusätzlich stellt die ex vivo Modell eine einzigartige Gelegenheit, und wertvolle epithelialen…
The authors have nothing to disclose.
Die Unterstützung der Lions Eye Bank of Delaware Valley war für diese Arbeit von unschätzbarem Wert. Primäre Maus-monoklonaler Antikörper gegen ICP8 war eine Art Geschenk von Dr. David Knipe (Harvard Medical School). Wir danken auch Dr. Stephen Jennings (Drexel University College of Medicine) und Dr. Peter Laibson (Wills Eye Institute) für hilfreiche Diskussionen und Know-how.
Reagents/Supplies | Company | Catalogue # |
Minimum Essential Medium (MEM) | Mediatech | 10-010-CV |
Non-Essential Amino Acids (100x solution) | Mediatech | 25-025-CI |
L-Glutamine | Mediatech | 25-005-CI |
Penicillin G Sodium Salt | Sigma | P3032 |
Streptomycin Sulfate Salt | Sigma | S9137 |
Agarose | Invitrogen | 15510-027 |
Phosphate Buffered Saline (PBS) | Prepared in lab | N/A |
Trypsin EDTA (1x) | Mediatech | 25-053-CI |
DNeasy Blood & Tissue Kit | QIAGEN | 69504 |
RNeasy Mini Kit | QIAGEN | 74104 |
Laemmli Buffer | Prepared in lab | N/A |
Optimal Cutting Temperature (OCT) Compound | Tissue-Tek | 4583 |
Whole Rabbit Eyes (Young) | Pel-Freez | 41211-2 |
Human Corneas and Whole Eyes | Local Eye Bank | N/A |
12 Well Porcelain Spot Plate | Avogadro’s Lab Supply | 1877 |
35 mm Tissue Culture Dish | Falcon | 353001 |
6 Well Cell Culture Plate | Greiner Bio-One | 657160 |
Cryomold Intermediate | Tissue-Tek | 4566 |