Espansione linfociti T citotossici da sangue del cordone ombelicale che Target Citomegalovirus, virus di Epstein-Barr virus, e Adenovirus
Summary
Qui si descrive la prima pratica di fabbricazione (GMP) conforme metodo per produrre virus-specifici linfociti T citotossici (CTL) da sangue del cordone ombelicale, fonte di cellule T prevalentemente ingenuo.
Abstract
Infezione da virus dopo il trapianto di cellule staminali sono tra le cause più comuni di morte, specialmente dopo sangue cordonale (CB) trapianto (CBT) in cui l'organismo di certificazione non contiene numeri notevoli di virus-esperti cellule T in grado di proteggere il destinatario dalle infezioni 1. – 4 Noi e altri hanno dimostrato che virus specifica CTL generati da donatori sieropositivi e infuso al destinatario sono sicuri e protettivi. 5-8 Tuttavia, fino a poco tempo, virus-specifiche cellule T non può essere generato dal sangue del cordone ombelicale, probabilmente a causa del assenza di celle di memoria virus-T specifiche.
Nel tentativo di imitare il meglio de condizioni di innesco in vivo di cellule T naive, abbiamo stabilito un metodo utilizzato CB derivate da cellule dendritiche (DC) trasdotte con un vettore adenovirale (Ad5f35pp65) contenente l'antigene immunodominante CMV pp65, quindi guidare specificità delle cellule T verso CMV e adenovirus. 9 Alla iniziazione, usiamo queste macchineDCs strutturati come anche cellule T CB-derivato in presenza delle citochine IL-7, IL-12 e IL-15. 10 Alla stimolazione secondo abbiamo usato EBV-trasformate cellule B, o EBV-LCL, che esprimono sia latente e litiche antigeni EBV. Ad5f35pp65-trasdotte EBV-LCL sono usati per stimolare le cellule T in presenza di IL-15 alla seconda stimolazione. Stimoli successivi utilizzano Ad5f35pp65-trasdotte EBV-LCL e IL-2.
Da 50×10 6 cellule mononucleate CB siamo in grado di generare l'alto di 150 x 10 6 cellule T virus-specifici che lisare antigene-pulsate obiettivi e citochine rilascio in risposta alla stimolazione antigenica. 11 Queste cellule sono state prodotte in un modo conforme GMP utilizzando solo la frazione al 20% di una unità di sangue del cordone frazionato e tradotti per l'uso clinico.
Protocol
Discussion
Attuali strategie volte a controllare le infezioni virali dopo CBT può essere efficace, ma sono associati a tossicità significative, sono costosi, e non conferiscono protezione a lungo termine contro l'infezione in seguito. In effetti, l'uso di alcuni farmaci antivirali possono limitare l'espansione del virus-specifiche cellule T che altrimenti sarebbero protettivo. 14 Un'altra opzione è l'infusione di donatore-derivati virus-cellule T specifiche. Noi e altri hanno dimostrat…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto da un L. Dan Duncan collaborativa assegno di ricerca (CMB e EJS), il National Heart, Lung, and Blood Institute (US4HL081007), un Leukemia and Lymphoma Society Clinical Research Scholar premio (CMB), e il National Cancer Institute (RO1 CA06150816; EJS).
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 21870-076 |
| DC media | CellGenix | 20801-0500 |
| EHAA (Click’s Medium) | Irvine Scientific | 9195 |
| Human Serum | Gemini Bio Products | 100-110 |
| Gas Permeable Cultureware18 | Wilson-Wolf | 80040S |
| IL-2 | Chiron (TCH Pharmacy) | |
| IL-12 | NCI/CTEP | |
| IL-15 | CellGenix | 1013-050 |
| IL-7 | R&D | AFL207 |
| IL-1beta | R&D | AFL201 |
| IL-6 | CellGenix | 1004-050 |
| GM-CSF | TCH Pharmacy | |
| IL-4 | R&D | AFL204 |
| TNF-alpha | R&D | AFL210 |
| Ad5f35pp65 | BCM CAGT Vector Production Facility | |
| Plasma transfer set with female luer adapter | Charter Medical | 89-550-66j |
| Lymphoprep | Nycomed | 1114550 |
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