Kemirgenler Akustik irkilme alışkanlık ve prepulse inhibisyonu

1. Protokol Tasarımı Kalibrasyon: bir dizi deney öncesinde, hoparlörler kalibre edin. Bu hoparlör deneyci tarafından kurulmuştur tam hacim gösterecek, böylece bu önemlidir. Ayrıca tedarikçi kılavuzuna göre irkilme kutuları transdüser platformu duyarlılığını kalibre edin. Dönüştürücü bir voltaj sinyali platformu dikey hareketi dönüştürür. Sistem kalibre hiçbir süregelen deneyler vardır ki, ve tüm kutuları aynı şekilde kalibre olduğunu emin olun. i / o fonksiyonu: fareler ya da sıçanlar, yeni suşların ölçülür, bir giriş / çıkış fonksiyonu tesis edilmelidir. 65 – 68 dB (aşağıya bakın) sabit bir arka plan beyaz gürültü ile 5-10 dakika bir aklimasyonundan süre sonra, irkilme uyaranlara (20 ms beyaz gürültü), 70-75 etrafında dB başlangıç, her 20 saniyede görüntülenir olmalıdır. Irkilme uyaran yoğunluğu 10-30 çalışmalarda irkilme uyaranlara (bkz. Şekil 1), 120-130 dB ulaşana kadar her uyaran 2-5 dB arasında artmış olacak. Protokol yapısı: alışma ve inhibisyonu prepulse bir protokol içinde ölçülebilir. Protokolü bir aklimasyonundan süre ayrılır, hemen bir blok II (ÜFE, Şekil 2) takip (alışkanlık), bir blok. Inhibisyonu prepulse ölçme önce, hayvanlar her zaman alışkanlık nedeniyle irkilme Zayıflamalar ÜFE ölçümleri ile karışmaz, böylece, irkilme alışkanlık geçmelidir. Aklimasyonundan süre: bir hayvan test her zaman, ilk kez hayvan sahibinin, irkilme kutusu ve arka plan gürültü uyum sağlamak amacıyla bir aklimasyonundan faz uğrar. 5-10 dakika aklimasyonundan dönemde, 65-68dB beyaz gürültü sabit arka plan gürültü (çevre gürültü bağlı olarak) görüntülenir, ancak herhangi bir irkilme uyaranlar. Bu dönemde hayvan, sakin ortamı keşfetmek için durdurmak ve etrafında hareket durdurmak. Ben alışkanlık Blok: 30 -100 irkilme uyaranlar arasında kısa süreli bir alışkanlık (STH) için arka plan uygulanmalıdır . Irkilme uyaranlara 20 ms süresi genellikle beyaz sesler ve çok dik bir yükselme süreleri (0, eğer mümkünse). Yoğunluğu i / o fonksiyonu genellikle 105 – 115 dB maksimum irkilme tepkisi plato ulaşan ses seviyesinde ideal. Tek denemeler arasında aralıklarla 10 ve 30 sn (tartışma ve bkz. Şekil 3) arasında da her zaman 20 sn veya randomize olmalıdır. Block II inhibisyonu prepulse: blok II pseudorandomized prepulse ile bir irkilme tek başına darbe ve denemeler ÜFE, deneme ölçmek için. Arka plan gürültüsü ve irkilme uyaran blok I. aynı prepulse süresi 4 ms beyaz gürültü ve ayrıca dik yükselme zamanı. İki parametre çeşitli olabilir: prepulse ve nabız ve prepulse yoğunluğu irkilme (tartışma) arasındaki interstimulus aralığı. Biz genellikle iki farklı prepulse yoğunlukları (75 ve 85 dB) ve iki farklı interstimulus aralıklarla (30 ms ve 100 ms) kullanmanızı öneriyoruz. Böylece dört farklı prepulse darbeli çalışmalarda artı pseudorandomized ve 50 denemeler toplamları 10 kat, her görüntülenen yalnız irkilme darbe denemeleri vardır. Inter-deneme aralıklarla, 10 ve 30 sn (tartışma) arasında 20 saniye veya rastgele olabilir. Bazı durumlarda (bkz. tartışma ve Şekil 4), tek başına bir prepulse deneme çalışmaların altıncı bir tür eklemek için faydalı olabilir. Uzun vadeli alışkanlık: LTH ölçmek amacıyla, tüm protokol, en az beş gün sonraki çalıştırılır . Alternatif olarak, sadece aklimasyonundan faz ve blok, LTH görmek için en az 100 irkilme uyaranlara içermelidir engellemek amacıyla, ancak, çalışma olabilir. Günde ortalama 30 uyaranların sunum özellikle farelerde, çoğu hayvanın çok az veya hiç LTH yol açar. Irkilme tepkisi genlikleri gündüz döngüsü ile dalgalanma bu yana çalışır, her gün yaklaşık aynı zamanda olmalıdır. 2. Hayvanların taşınması ve aklimasyonundan Sıçanlarda karşı farelerin taşıma ve aklimasyonundan büyük farklılıklar vardır. Fare 2-5 dakika ama arka plan gürültüsü ile herhangi bir irkilme uyaranlara (program aklimasyonundan faz) için uygun hayvan sahibinin (onlar ölçülü olmamalıdır) içine yerleştirilir. Bu prosedür, dışkılama ve idrar fare tutucu durur ya da önemli ölçüde azalır kadar günde bir veya iki kez, 3-5 kez tekrar edilmelidir. Hayvan sahipleri her zaman değiştirilebilir veya bir hayvan kaldırıldıktan sonra temizlenmesi gerekir. Sıçanlar en az üç seans 17 ile ele alınmalıdır. Üçüncü taşıma oturumların sonunda uygun bir hayvan sahibinin (hayır dizginlemek) içine yerleştirilir ve birkaç dakika için arka plan gürültüye maruz. Çıkardıktan sonra, p oluşturmak için ayçiçeği tohumu ile ödüllendirdi.test prosedürü ile ositive dernekler. Bu prosedür, tüm protokol çalıştırılmadan önce, giderek aklimasyonundan süresi genişleyen iki kez daha tekrarlanır. Oturumları test etmek için, hayvanlar, tüm odaların içine yerleştirilir, kapıları kapalı ve aklimasyonundan aşaması ile protokol, blok ve blok II çalıştırılır. Farklı hayvan grupları (enjeksiyon, genotiplerin) varsa, onlar farklı çalışır ve farklı kutuları üzerinde, karışık ya da randomize olmalıdır. Bir hayvan tekrar tekrar test edilir (örneğin, farklı tedaviler ile), o da aynı kutuya yeniden test edilmelidir. Sıçanlarda tekrarlanan ÜFE test etmek için, biz de gerçek veri toplama gerçekleşmeden önce bütün bir protokol çalıştırmak için tavsiye ederiz. ÜFE genellikle birinci ve ikinci test oturumu (ÜFE öğrenme) arasında geliştirir ve sonrasında tutarlı kalır. Ayrıca LTH büyük bir kısmını ortadan kaldıracaktır. 3. Veri Analizi Kısa vadeli alışkanlık: kısa vadeli alışkanlık analizi için, blok tüm irkilme yanıtları, her bir hayvan için çizilir . Bir grup içinde hayvanların benzer irkilme tepkisi genlikleri varsa, değerleri hayvanlar arasında ortalama olabilir. Çoğu durumda, ancak, mutlak irkilme genlikleri hayvan ve irkilme seviyeleri arasında önemli farklılıklar normal dağılım. Bu durumda, her bir hayvanın, ilk veri normalleştirmek için daha uygun, ya da ilk iki blok, irkilme yanıtları ortalama (hayvanlar, düşük ilk irkilme tepkisi aklimasyonundan aşamasında bazen uykuya dalmak ve yüksek ikinci irkilme). Normalize edilmiş veriler daha sonra alışkanlık ders arsa için tüm hayvanlar arasında ortalama olabilir. Alışma miktarı kantitatif bir değerlendirme için, her hayvan için, örneğin ilk iki yanıtları (Şekil 6) ortalama bölünmüş son 10 irkilme yanıtları ortalama bir puan hesaplanır. Prepulse inhibisyonu: prepulse inhibisyonu analiz etmek için, blok II veri deneme türü (örneğin, yoğunluğu ve süresi ISI prepulse excel ve sıralama, ilgili tüm veri sütunları ihraç ederek) göre sıralanabilir. Deneme tipine göre on izleri daha sonra ortalaması alınır ve prepulse darbeli çalışmalarda elde edilen değerler, irkilme tek başına darbe değeri bölünür ve 100 ile çarpılır. Bu her hayvan için farklı prepulse koşullar altında kalan irkilme (bazal irkilme yüzde) miktarını ortaya koymaktadır. Temel irkilme (darbe yalnız)% 100'dür. Bu değerler daha sonra bir grup hayvanlar arasında ortalama ve çizilir (Şekil 7a). Alternatif olarak, miktar, ÜFE% 100 (Şekil 7b) kalan irkilme tepkisi çıkarılarak çizilebilir. Lütfen dikkat: hayvanların farklı gruplar ÜFE karşılaştırdığımız zaman, her zaman da örneğin irkilme darbe yalnız çalışmaların mutlak irkilme genlikleri (veya blok Ben irkilme genlikleri) karşılaştırarak, bazal irkilme genlikleri bir fark olup olmadığını rapor etmelidir . Uzun vadeli alışkanlık: her gün ben blok ilk iki yanıtları LTH analiz etmek için ortalama en az beş test oturumları üzerinde çizilir . Bu STH farklılıklar LTH analiz sonucu etkileyen olasılığını ortadan kaldırır. Ben sadece bir tedavi / gen blok STH, alternatif olarak tüm yanıtları etkilemez kurulmuşsa her gün için ortalama olabilir ve çizilir. LTH LTH görüntülendikten sonra ilk irkilme seviyesi yüzdesi kalan, böylece, son günlerde 100 ile değer 'değeri ilk gün bölünür ve çarpılan bir alışkanlık puanı hesaplanması ile belirlenebilir. Alışkanlık puanları daha sonra hayvanlar (Şekil 8) üzerinden ortalama olabilir. 4. Temsilcisi Sonuçlar: i / o fonksiyonu: Kemirgenler (20 ms süresi, beyaz gürültü) tipik olarak 85-90 dB ses irkilme başlar. Irkilme tepkisi artan hacmi artar ve normalde 100-110 dB maksimuma ulaşır. Hayvanlar bu değerlerden oldukça saparsanız, hayvanların duyma yetenekleri ya da motor yetenekleri bozulmuş olabilir. Tipik I / O fonksiyonları Şekil 5 gösterilir. Kısa vadeli alışkanlık: İyi ele sıçan normalde ilk irkilme tepkisi yaklaşık% 60 alışmakta, ancak büyük bireysel farklılıklar ve gerginlik farklılıkları da vardır. Güçlü alışkanlık etkisi ilk birkaç uyaranlara içinde normal olarak oluşur. Fareler genellikle sıçan (genellikle yaklaşık% 80) daha az alıştırarak, ancak gerginlik farklılıklar çok büyük olabilir. Tipik bir alışkanlık kursu Şekil 6'da gösterilmiştir. Prepulse inhibisyonu: Çoğu sıçanlarda optimal bir prepulse (85dB, 4 ms, beyaz gürültü) ile yaklaşık% 90 ÜFE göstermektedir. ÜFE çok sağlam ve bireysel farklılıklar bu deneysel ayarları ile nispeten küçük. Düşük hacimli prepulsesdaha az verim ÜFE ve daha fazla değişkenlik (hatta bir hayvan içinde) değil, aynı zamanda, farmakolojik ve genetik manipülasyonlar karşı daha savunmasız gibi görünüyor. Farklı ÜFE sonuçları Şekil 7'de çizilmiştir. Uzun vadeli alışkanlık: Uzun vadeli alışkanlık birkaç test oturumları üzerinde görülebilir. LTH sıçanlarda çok sağlamdır. Farelerde, genellikle LTH gözlemlemek için, her oturumda irkilme uyaranların çok sunum gerektirir. Tipik LTH sonuçlar Şekil 8'de görülebilir. Şekil 1 i / o fonksiyonu için Stimulus protokolü. Aklimasyonundan süresi 5-10 dakika sonra. 65 dB ses basınç seviyesi (SPL) arka plan gürültü ve irkilme uyaranlara (gösterilmemiştir), 20 ms beyaz gürültü uyaranlara her 20 saniyede sunulmaktadır. Yoğunluğu kademeli olarak 5 dB adımlarla (bg = arka plan gürültüsü) 75 – 130 dB artar. Şekil 2 kombine alışkanlık ve ÜFE ölçümü için protokol yapısı tüm protokol sırasında, sabit bir arka plan gürültüsü 65 dB uygulanır. 5-10 dakika aklimasyonundan süresi vardır. herhangi bir uyarı olmaksızın. Hemen sonra, alışkanlık 30-100 irkilme uyaranlara (bkz. Şekil 3, ben blok) tarafından test edilir. Bu hemen ÜFE test (blok II, Şekil 4) tarafından takip edilmektedir. Şekil 3 alışkanlık ölçmek için Stimulus protokolü (blok) kısa vadeli alışkanlık test için tipik bir blok için bir örnek gösterilmiştir. 0 yükselme süresi 20 ms 105 dB beyaz gürültü 20 sn arası bir deneme aralığı (ITI) ile başvuran 30 100 aynı çalışmaların oluşur. Bu protokol Varyasyonları irkilme uyaran yüksek yoğunluklarda veya değişken ITIS içerebilir Şekil 4 ölçüm ÜFE (blok II) Stimulus protokol test ÜFE için bir blok II tipik bir bölümü için bir örnek gösterilmiştir. Block II pseudorandomized amacıyla her biri 10 kez sunulmaktadır 5-6 farklı deneme türleri oluşur. Burada iki farklı yoğunluklarda prepulse (75 dB ve 85 dB) ve iki farklı interstimulus aralıklarla (ISIS, 30 ve 100 ms) test edilmektedir. Irkilme uyaran çalışmalarda yalnız ve yalnız prepulse çalışmalarda serpiştirilmiş. Bu blok, 6×10 = 60 denemeler olurdu. Prepulses 0 yükselme süresi 4 ms beyaz gürültü bakliyat. Bu protokolün Varyasyonları değişken ITIS, irkilme uyaran yoğunlukları yüksek, farklı prepulse şiddetleri ve / veya süreleri ve ISIS prepulse ve nabız arasında farklı oluşacaktı. Şekil 5 Örnek bir i / o fonksiyonu için 11 ayrı farelerin aynı gerginlik giriş / çıkış eğrileri gri olarak görüntülenir. Bu durumda, bireysel irkilme genlikleri (irkilme yanıtları keyfi birimlerinde) önemli ölçüde değişir. Düz siyah bir çizgi, farklı irkilme uyaran yoğunluklarda, ortalama irkilme genlikleri ve standart hataları gösterir. Bu fareler, 105 dolayında dB maksimum irkilme tepkisi ulaştı. Şekil 6 Örnek, kısa vadeli alışkanlık veriler için tipik bir 20 fareler ortalama kısa vadeli alışkanlık eğrisi gösterilmiştir . 30 irkilme uyaranlara yanıt olarak her fare irkilme genlikleri çalışmalarda 1 ve 2 'de ilk iki irkilme yanıtları ortalama normalize edildi. Normalize edilmiş veriler daha sonra fareler üzerinden ortalama ve standart hata hesaplanır. Şekil 7 ÜFE verileri Örnek: 8 farelerin Ortalamalı ÜFE verileri gösterilir. 10 blok II irkilme başına çalışmalarda, her bir fare için ortalama ve diğer deneme türleri ortalamaları tek uyaran irkilme genlikleri yüzdesi olarak ifade edildi. Bu rakam, irkilme tepkisi genlikleri farklı prepulse koşullar altında gösterir. İki farklı ISIS (30 ve 100 ms) ve iki farklı prepulse yoğunlukları (75 ve 85 dB) ölçüldü. B: Aynı A gibi veriler, ancak, başlangıçtaki irkilme yüzde ÜFE miktarı olarak çizilir. Yukarıda gösterilen veriler 100 çıkarılır. Bu farelerin% 50 civarında bir maksimum ÜFE gösterdi. Lütfen dikkat aynı protokolü, yaklaşık% 90 en sıçan suşları ÜFE verim. Şekil 8, uzun vadeli bir alışkanlık veri Örnek: 18 fareler için Ortalamalı LTH veriler gösterilir . To ilk iki irkilme yanıtları blok, her gün tüm fareler üzerinden ortalaması alınmıştır. Göreceli olarak büyük bir standart hata çubukları, esas olarak, bireysel fareler arasında mutlak irkilme genlik farklılıklardan kaynaklanır. B: beş gün boyunca 18 farelerin Normalize irkilme genlikleri. Gürültüsünü azaltmak için, blok (30 uyaranlara) 6 ardışık irkilme yanıtları gruplar her zaman blok Hergün her bir hayvan için beş değerleri, hayvan başına ortalama edildi. Bunlar, ilk günün ilk değeri (% 100) her bir hayvan için normalize edildi. Tüm 18 hayvanlar üzerinde ortalama görüntülenir. Bu beş gün boyunca her gün içinde STH yanı sıra LTH gösterir.