설치류의 어쿠스틱 놀라게의 요법 이니 및 Prepulse 억제

1. 프로토콜 설계 보정 : 실험 세트하기 전에 스피커를 보정. 그 스피커는 실험자에 의해 설정된 정확한 볼륨을 표시하므로이 중요합니다. 또한 공급 업체의 설명서에 따라 놀라게 상자의 변환기 플랫폼의 감도를 보정. 변환기는 전압 신호로 플랫폼의 수직 운동을 변환합니다. 시스템을 보정하면 더 지속적인 실험가 없다는 것을, 모든 상자는 같은 방법으로 보정하고 있는지 확인합니다. I / O 기능 : 마우스 또는 쥐의 새로운 변종을 측정하는 경우, 입력 / 출력 기능이 설립되어야합니다. 65-68데시벨 (아래 참조)의 지속적인 배경 백색 잡음과 5-10분의 acclimation 기간 후 놀라게의 자극은 (​​20 MS 백색 소음) 70-75 주위 dB에서 시작, 매 20 초 표시되어야합니다. 놀라게 자극의 강도는 놀라게 자극 (그림 1 참조) 10-30 실험의 결과, 120~130데시벨에 도달하기 전까지 2~5데시벨 각 자극 사이에 증가합니다. 프로토콜 구조 : 요법 이니 및 억제 prepulse 한 프로토콜 안에 측정할 수 있습니다. 프로토콜은 acclimation 기간으로 나누어져 있습니다, 바로 블록 II (PPI, 그림 2) 다음 블록 I (요법 이니). 억제 prepulse 측정하기 전에 동물은 항상 요법 이니에 의한 놀라게 attenuations는 PPI 측정을 방해하지 않도록, 놀라게 요법 이니를 받아야한다. Acclimation 기간 : 동물이 테스트 때마다, 그것이 먼저 동물 홀더, 놀라게 상자와 배경 잡음에 적응하기 위해 acclimation 단계를 겪습. 50-10분의 acclimation 기간 동안 65-68데시벨 백색 소음의 지속적인 배경 소음 (환경의 소음에 따라) 표시했지만, 놀라게의 자극.입니다 이 단계 동안 동물은, 진정 환경을 탐험하는 중지하고 주위에 이동 중단됩니다. I 요법 이니 블럭 : 30 -100 놀라게의 자극 사이의 단기 요법 이니 (앳 StH)에 대한 배경에 적용해야합니다. 놀라게 자극은 20 MS 기간 일반적으로 백색 소음 매우 가파른 상승 시간 (0, 가능한 경우)입니다. 강도는 I / O 함수는 일반적으로 1백5~1백15데시벨에서 최대 놀라게 응답의 고원을 도달 볼륨에서 이상적으로있다. 하나의 시련 사이의 간격은 10 ~ 30 초 (토론 그림 3 참조) 사이에 중 항상 20 초 또는 무작위로해야합니다. 블록 II는 억제 prepulse : 블록 II의 pseudorandomized하는 prepulse와 놀라게 혼자 맥박과 시련과 함께 PPI, 시련을 평가하기 위해. 배경 노이즈와 놀라게 자극이 차단 I.에서와 같이 동일합니다 prepulse 4 MS 기간 백색 잡음 또한 가파른 상승 시간입니다. 두 매개 변수는 다양한 수 있습니다 prepulse 및 펄스와 prepulse의 강도를 (토론 참조) 깜짝 놀라게 사이 interstimulus 간격을. 우리는 일반적으로 두 개의 다른 prepulse 농도 (75 및 85dB)와 두 개의 다른 interstimulus 간격을 (30 MS 100 MS)를 사용하여 제안합니다. 따라서 네 가지 prepulse – 펄스 실험 플러스 혼자 놀라게 맥박이 시련 pseudorandomized 50 시련을 합계 10 배 각각을 표시할 수있다. 인터 – 시험 간격은 10 ~ 30 초 (토론 참조) 사이에 20 초 또는 무작위 중 하나가 될 수 있습니다. 어떤 경우에는 그것은 (토론과 그림 4 참조) 혼자 prepulse 시험이다 시험의 육분의 일 유형을 추가로 도움이 될 수도 있습니다. 장기 요법 이니 : LTH를 측정하기 위해, 전체 프로토콜 적어도 다섯 이후의 날짜에 실행됩니다. 또는, 단지 acclimation 단계와 블록 나는, LTH를 만나러 100 적어도 놀라게 자극을 포함해야 차단하기 위해, 그러나, 실행할 수 있습니다. 하루에 30 자극의 프레 젠 테이션 특히 생쥐에서, 대부분의 동물에서 매우 거의 또는 전혀 LTH 발생합니다. 놀라게 응답 amplitudes은 낮의주기와 변동 이후 실행은 매일 거의 같은 시간에해야합니다. 2. 동물의 취급 및 Acclimation 쥐 대 생쥐의 취급 및 acclimation 큰 차이가 있습니다. 생쥐는 2-5 배경 노이즈가 분 그런데 놀라게 자극 (프로그램의 acclimation 단계)에 해당하는 동물의 소유자 (그들은 구속하지 않아야)에 배치됩니다. 마우스 홀더에 깨끗하게 함 및 배뇨가 중단 또는 상당히 감소 때까지이 절차는 한 두 번 하루에 3-5 번 반복해야합니다. 동물의 소유자는 항상 교체 또는 동물을 제거한 후 청소한다. 쥐는 최소한 세 세션 17 처리되어야합니다. 세 번째 처리 세션의 끝에 그들은 적절한 동물 홀더 (NO 제지)에 배치하고 몇 분 동안 배경 소음에 노출. 그들을 제거 후, ​​그들은 P를 형성하기 위해 해바라기 씨앗과 함께 보상을받을 수 있습니다테스트 절차 ositive 협회. 전체 프로토콜이 실행되기 전에이 절차는 점차 acclimation 시간을 확대, 두 번 더 반복합니다. 세션을 테스트하기 위해, 동물은 모든 챔버에 배치되며, 문은 닫히고 acclimation 위상과 프로토콜, 나는을 차단하고 차단 II가 실행됩니다. 동물의 다양한 그룹 (주사, genotypes)가있다면, 그들은 서로 다른 실행되고 다른 상자를 통해 혼합하거나 무작위로해야합니다. 동물 반복적으로 (다른 트리 트먼트 등) 테스트하는 경우, 그것은 동일한 상자에 다시 테스트해야합니다. 쥐에서 반복 PPI 테스트, 우리는 실제 데이터 수집이 일어나기 전에 모든 프로토콜을 실행하는 것이 좋습니다. PPI는 종종 첫 번째와 두 번째 테스트 세션 (PPI 학습) 사이 개선하고, 이후 지속적인 유지. 또한 LTH의 큰 부분을 제거합니다. 3. 데이터 분석 단기 요법 이니 : 단기 요법 이니, 분석을 위해, 블록의 모든 놀라게 반응은 내가 각 동물 꾸몄다 있습니다. 그룹 내에서 동물 비슷한 놀라게 응답 amplitudes있다면, 가치가 동물 사이의 평균 수 있습니다. 대부분의 경우, 그러나 절대 놀라게의 amplitudes 동물과 놀라게 수준 사이에 상당한 차이가 정상적으로 배포되지 않습니다. 이 경우는 먼저 각 동물의 데이터를 정상화 더 실용적이다, 또는 블록의 첫 번째 두 놀라게 응답의 평균 I (동물들이 때로는 낮은 첫번째 놀라게 응답의 결과 acclimation 단계 동안 잠이 높은 둘째 놀라게). 정규화된 데이터는 요법 이니의 과정을 계획하기 위해서는 모든 동물에 걸쳐 평균 수 있습니다. 요법 이니의 금액의 양적 평가, 점수는 각 동물에 대해, 첫 번째와 두 번째 응답 (그림 6)의 평균으로 나눈 지난 10 놀라게 응답의 평균을 계산 예 수 있습니다. 억제 Prepulse : prepulse 억제를 분석, 블록 II의 데이터가 재판의 종류 (예 : 강도와 ISI의 기간 prepulse하여 Excel 및 정렬에 관련된 모든 데이터 열을 내보내)에 따라 정렬되어야합니다. 시험 유형마다 10 흔적 그러면 평균되며, prepulse – 펄스 실험에 대한 결과 값은 놀라게 혼자의 펄스 값으로 나눈 100 곱한 수 있습니다. 이것은 각각의 동물에 대해 서로 다른 prepulse 조건에서 남은 놀라게 금액을 (기준 놀라게 비율)을 보여줍니다. 베이스 라인 놀라게 (펄스 혼자가) 100 %입니다. 이러한 값은 다음 그룹의 동물에 걸쳐 평균 수 있으며 (그림 7A) 꾸몄다 수 있습니다. 또는 PPI의 양을 100 % (그림 7B)에서 나머지 놀라게 응답을 빼서으로 꾸몄다 수 있습니다. 양해하여 주시기 바랍니다 : 당신이 동물의 다른 그룹으로 PPI를 비교할 때, 당신은 항상도 기준 놀라게 amplitudes의 차이점은 예 놀라게 펄스 혼자 재판의 절대 놀라게의 amplitudes (또는 블록 I에 놀라게 amplitudes) 비교하여, 거기에 있는지 여부를보고해야 . 장기 요법 이니 : 매일 I을 블록의 첫 두 답변을 LTH 분석하기 위해서는 평균 다섯 연속 테스트 세션의 최소 이상 꾸몄다 있습니다. 이것은 앳 StH의 차이가 LTH 분석의 결과에 영향을 미칠 가능성을 없애줍니다. 그것이 치료 / 유전자가 블록에서 앳 StH, 또는 모든 응답에 영향을주지 않습니다 설립되었습니다면 단순히 매일 평균 수 있으며 꾸몄다 수 있습니다. LTH는 LTH가 표시된 후에 초기 놀라게 수준의 비율이 남아 있도록 지난 일 100 값 '값이 첫 번째 일로 나눈 것입니다'와 곱한 요법 이니, 점수 계산에 의해 계량하실 수 있습니다. 요법 이니 점수는 다음 동물 (그림 8)에 걸쳐 평균 수 있습니다. 4. 대표 결과 : I / O는 기능 : 설치류는 일반적으로 (20 MS 기간, 백색 잡음)에서 85-90데시벨의 볼륨에서 놀라게 시작합니다. 놀라게 반응은 증가 볼륨 증가하고 일반적으로 1백~1백10dB에 최대에 도달합니다. 동물이 가치에서 상당히 이탈하면, 동물은 청각 능력이나 운동 능력을 방해 할 수도 있습니다. 일반적인 I / O 함수는 그림 5에 표시됩니다. 단기 요법 이니 : 글쎄요 처리 쥐가 정상적으로 자신의 초기 놀라게 응답의 60 % 정도에 길들 있지만, 거대한 개인차 또한 스트레인 차이가 있습니다. 강한 요법 이니, 효과는 처음 몇 자극 이내에 정상적으로 발생합니다. 마우스는 일반적으로 쥐 (일반적으로 80 %까지) 이하를 길들지만, 스트레인 차이가 매우 큰 수 있습니다. 전형적인 요법 이니, 과정은 그림 6에 표시됩니다. 억제 Prepulse : 대부분의 쥐들이 최적 prepulse (85dB, 4 MS, 화이트 노이즈)의 90 % 정도의 PPI를 보여줍니다. PPI는 매우 강력하고 개별적인 차이는이 실험 설정 상대적으로 작은 수 있습니다. 낮은 볼륨 prepulses덜 PPI 더 많은 다양성을 (심지어 동물 이내) 생산량뿐만 아니라 약리 또는 유전 조작에 더 취약한 것으로 보인다. 다른 PPI 결과가 그림 7에 꾸몄다 있습니다. 장기 요법 이니 : 장기 요법 이니,이 여러 테스트 세션을 통해 볼 수 있습니다. LTH 쥐가 매우 강력합니다. 생쥐에서는 종종 LTH을 관찰하기 위해 각 세션에 놀라게 자극의 많은 프레 젠 테이션이 필요합니다. 일반 LTH 결과는 그림 8에서 볼 수 있습니다. 그림 1. I / O 기능을 위해 자극 프로토콜. 5-10 분 acclimation 기간 후에. 65dB 사운드 압력 레벨 (SPL) 배경 소음없이 놀라게 자극 (표시되지 않음)와 함께, 20 MS 백색 소음 자극은 매 20 초 제공됩니다. 강도는 점차 5dB 증가 (BG = 잡음) 75에서 130dB로 증가합니다. 그림 2. 결합 요법 이니 및 PPI 측정을위한 프로토콜 구조. 전체 프로토콜 동안, 65dB의 일정한 잡음이 적용됩니다. 50-10 분 acclimation 기간이 있습니다. 더 이상 자극하지 않고. 바로 그 이후, 요법 이니가 30-100 놀라게 자극 (그림 3 참조, 내가 차단)에 의해 테스트됩니다. 이것은 즉시 PPI 테스트 (블록 II, 그림 4 참조) 다음이다. 그림 3. 요법 이니 측정을위한 자극 프로토콜 (블록 I)가. 단기 요법 이니, 테스트에 대한 일반적인 블록 I에 대한 예제는 표시됩니다. 그것은 0 상승 시간 20 MS 105dB 백색 잡음은 20 초의 인터 시험 간격 (ITI)와 함께 제공됩니다 30 100 동일 실험으로 구성되어 있습니다. 이 프로토콜의 유사 높은 놀라게의 자극 농도 또는 변수 ITIs를 포함할 수 있습니다 그림 4. 측정 PPI (블록 II)에 대한 자극 프로토콜. 테스트 PPI를위한 블록 II의 전형적인 부분에 대한 예제는 표시됩니다. 블록 II는 pseudorandomized 순서로 10 번 각각 제공됩니다 5-6 다양한 시험 유형으로 구성되어 있습니다. 여기, 두 개의 다른 prepulse 농도 (75dB와 85dB)와 두 개의 다른 interstimulus 간격은 (이지스, 30 및 100 MS) 테스트입니다. 놀라게 혼자의 자극 실험 혼자 prepulse는 재판이 interspersed됩니다. 이 블록은 6×10 = 60 시련을 얻을 수 있습니다. Prepulses 0 상승 시간 4 개 MS 백색 잡음 펄스입니다. 이 프로토콜의 유사 변수 ITIs 높은 놀라게의 자극 농도, 다른 prepulse 농도 및 / 또는 기간이, 그리고 prepulse 및 펄스 사이에 다른 이지스로 구성되어 있습니다 것입니다. 그림 5. I / O 기능에 대한 예제는. 같은 변형 11 개인 마우스의 입력 / 출력 곡선은 회색으로 표시됩니다. 이 경우, 개별 놀라게의 amplitudes은 (놀라게 응답이 임의의 단위로 있습니다) 상당히 다릅니다. 단단한 검은 라인은 다른 놀라게 자극 농도에서 평균 놀라게의 amplitudes 및 표준 오류를 표시합니다. 이 마우스는 105 dB 주위에서 자신의 최대 놀라게 응답에 도달했습니다. 그림 6. 단기 요법 이니, 데이터에 대한 예제는. 20 마우스의 전형적인 평균 단기 요법 이니, 곡선이 표시됩니다. 30 놀라게 정보 자극에 반응에있는 각 마우스의 놀라게 amplitudes는 재판 1 & 2 년에 첫 두 놀라게 응답의 평균 표준되었습니다. 정규화된 데이터는 생쥐에 걸쳐 평균이고 표준 오류가 계산했습니다. 그림 7 PPI 데이터에 대한 예제 A :.. 8 생쥐의 평균 PPI 데이터가 표시됩니다. 블록 II의 10 놀라게 혼자 시련은 각 마우스에 대한 평균 및 기타 시험 유형의 평균 혼자 자극 놀라게 amplitudes의 비율로 표현했다. 그림은 서로 다른 prepulse 조건 놀라게 응답 amplitudes를 보여줍니다. 두 개의 다른 이지스 (30 및 100 MS)와 두 개의 다른 prepulse 농도는 (75 85dB) 측정되었다. B : 동일한에서 같은 데이터지만, 기준 놀라게의 백분율로 PPI의 금액으로 꾸몄다. 위에 표시된 데이터는 100에서 빼는되었습니다. 이 생쥐는 50 % 정도의 최대 PPI을 보여주었다. 같은 프로토콜이 90 % 정도의 대부분의 쥐 종자의 PPI를 얻을 수 유의하시기 바랍니다. 그림 8 장기 요법 이니, 데이터에 대한 예제 A :.. 18 생쥐에 대한 평균 LTH 데이터가 표시됩니다. 티그는 처음 두 놀라게 응답 블록에서 매일 나는 모든 쥐가에 걸쳐 평균되었습니다. 비교적 큰 표준 오차 막대는 주로 개인의 생쥐간에 절대 놀라게 진폭의 차이로 인해 발생합니다. B : 오일 동안 18 생쥐의 표준화 놀라게의 amplitudes. 소음을 줄이기 위해, 블록 I (30 자극) 6 연속 놀라게 응답 그룹은 항상 블록 하루에 각 동물에 대한 I하기위한 다섯 가지 가치의 결과 동물의 당 평균되었습니다. 이들은 첫날의 첫 번째 값 (100 %) 각 동물에 대한 정상화되었습니다. 모든 18 동물 이상의 평균이 표시됩니다. 그것은 5 일 이내에 걸쳐 매일 앳 StH뿐만 아니라, LTH 보여줍니다.