Transretinal Recordings ERG de Retina do mouse: Rod e Photoresponses Cone
Summary
Nós descrevemos um método relativamente simples de transretinal eletrorretinograma (ERG) para a obtenção de gravações photoresponses haste e cone da retina do rato intacto. Esta abordagem tira vantagem do bloco de transmissão sináptica de fotorreceptores para isolar as suas respostas de luz e gravar os usando eléctrodos de campo colocados através da retina plana montado isolado.
Abstract
Existem duas classes distintas de imagem formadoras de fotorreceptores na retina de vertebrados: bastonetes e cones. Rods são capazes de detectar fótons individuais de luz, enquanto cones operar continuamente sob rápidas mudanças das condições de luz brilhante. A absorção de luz pela vara e cone específicos pigmentos visuais nos segmentos exteriores de fotorreceptores desencadeia uma cascata de fototransdução que conduz eventualmente a encerramento de nucleótidos cíclicos-gated canais na membrana plasmática e hiperpolarização da célula. Esta mudança induzida pela luz em corrente e potencial de membrana pode ser registrado como um photoresponse, por qualquer de sucção 1,2 eletrodo clássica técnica de gravação ou por gravações eletrorretinograma transretinal (ERG) de retinas isoladas com farmacologicamente bloqueados componentes da resposta pós-sinápticos 3-5. O último método permite a droga acessíveis de longa duração gravações de fotorreceptores do rato e é particularmente útil para a obtenção de photoresponses estáveis from os cones do mouse escassos e frágeis. No caso de cones, tais experimentos podem ser realizados tanto em condições de adaptação ao escuro e iluminação intensa seguinte que branqueia essencialmente todo o pigmento visual, para acompanhar o processo de recuperação fotossensibilidade cone durante a adaptação ao escuro 6,7. Neste vídeo, vamos mostrar como realizar vara e M / L-cone-driven gravações transretinal de escuro-adaptado retina mouse. Gravações haste irá ser efectuada utilizando retina do tipo selvagem (C57BL / 6) ratinhos. Por simplicidade, as gravações de cone será obtida a partir geneticamente modificado haste transducina α subunidade knockout (Tα – / -) ratinhos que carecem de haste de sinalização 8.
Protocol
Discussion
O método de vara e cone-driven gravações transretinal ERG descrito acima está se tornando uma poderosa ferramenta para investigar a função dos fotorreceptores do mouse tanto no tipo selvagem e animais geneticamente modificados. Além disso para a caracterização das propriedades de fácil photoresponse básicos, esta técnica simples fornece estabilidade grande resposta de longa duração, durante experimentos realizados em preparações próxima do intactas da retina. Ambos de adaptação ao escuro haste amplitu…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Apoiado pelo Prémio Carreira de Desenvolvimento de Pesquisa para a Prevenção da Cegueira, NIH concede EY19312 e EY19543 (VJK), bem como pela concessão irrestrita de Pesquisa para a Prevenção da Cegueira e EY02687 (Departamento de Oftalmologia e Ciências Visuais da Universidade de Washington).
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
| DL-AP-4 | TOCRIS bioscience | 0101 | ||
| All other reagents | Sigma-Aldrich | |||
| Glass capillaries | World Precision Instruments | TW100-4 | For making electrodes | |
| Filter paper | HARG | Millipore | HABG01300 | |
| Photometer | UDT Instruments | S350 | For light calibration | |
| Radiometric silicon sensor | UDT Instruments | 221 | For light calibration | |
| Anti-vibration table | Technical Manufacturing Corporation | TMC 78-239-02R, TMC63-26012-01 | To minimize mechanical noise | |
| Air compressor Panther P 15TC | Werther International | P 15TC | Connected to anti-vibration table | |
| Stereomicroscope | LEICA | MZ9.5 | For mouse eye dissection | |
| Infrared image converters | B.E.Meyers | ProwlerTM | Bound to stereomicroscope | |
| Differential amplifier DP-311 |
Warner Instruments | DP-311 | ||
| Axon Digidata 1440A Digitizer | Molecular Devices | 1440A | ||
| Dual Channel 8-pole Filter | KROHN-HITE Corporation | 3382 | ||
| Ceramic resistor | TE Connectivity | CGS SBCHE618RJ | For reheating the perfusion solution | |
| Thermocouple | T | Physitemp Instruments | IT-18 | |
| Temperature monitor | Omega | DPi32 | Connected to thermocouple | |
| LED 505 nm | TT Electronics/ Optek Technology | Digi-key P/N 365-1185-ND | To apply test flashes/bleaching light | |
| Cautery pen | Bovie | AA25 | For marking the dorsal part of the mouse eyeball | |
| pCLAMP 10 Electrophysiology Data Acquisition and Analysis Software | Molecular Devices |
Referencias
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