Questo articolo presenta un protocollo robusto per l'isolamento e la coltura di cellule staminali neurali cresta di follicoli dei capelli umani.
Follicoli dei capelli sottoposti a crescita continua e ciclo del capello è un ben controllato processo che coinvolge la proliferazione delle cellule staminali e della quiete. Rigonfiamento dei capelli è una nicchia ben caratterizzato per le cellule staminali adulte 1. Questo segmento della guaina esterna della radice contiene un certo numero di diversi tipi di cellule staminali, comprese le cellule staminali epiteliali 2, cellule staminali melanociti 3 e cresta neurale come cellule staminali 4-7. Follicoli dei capelli rappresentano una fonte accessibile e ricco per i diversi tipi di cellule staminali umane. Noi e gli altri hanno isolato le cellule staminali neurali cresta (NCSCs) di follicoli piliferi umani fetali e adulti 4,5. Queste cellule staminali umane sono etichette-cellule di sostegno e sono in grado di auto-rinnovamento attraverso la divisione cellulare asimmetrica in vitro. Esprimono immaturi marcatori di cellule neurali della cresta, ma non marcatori di differenziazione. Il nostro studio dei profili di espressione hanno dimostrato di condividere un simile pattern di espressione genica con la pelle di topo immaturo neurale crest cellule. Essi mostrano multipotenza clonale che possono dare origine a linee cellulari miogeniche, melanocitari e neuronale dopo coltura in vitro clonale singola cella. Le cellule differenziate non solo acquisire lineage-specifici marcatori, ma anche dimostrare funzioni appropriate in condizioni ex vivo. Inoltre, questi NCSCs mostrano il potenziale di differenziazione verso linee mesenchimali. Differenziati cellule neuronali possono persistere nel cervello di topo e mantenere marcatori del differenziamento neuronale. E 'stato dimostrato che follicolo pilifero derivato NCSCs può aiutare la ricrescita dei nervi, e migliorare la funzione motoria nei topi trapiantati con queste cellule staminali seguendo sezionare lesione spinale 8. Inoltre, i nervi periferici sono state riparate con innesti di cellule staminali 9, e l'impianto di pelle cellule derivate da precursori adiacenti schiacciato nervo sciatico ha portato a rimielinizzazione 10. Pertanto, i follicolo / pelle NCSCs capelli derivati hanno già mostrato risultati promettenti per rLa terapia egenerative in modelli preclinici.
Riprogrammazione di cellule somatiche di staminali pluripotenti indotte (iPS), le cellule hanno mostrato un enorme potenziale per la medicina rigenerativa. Tuttavia, ci sono ancora molti problemi con le cellule iPS, in particolare l'effetto a lungo termine di oncogene / virus integrazione e tumorigenicità potenziale delle cellule staminali pluripotenti non sono stati adeguatamente affrontati. Ci sono ancora molti ostacoli da superare prima che le cellule iPS possono essere utilizzati per la medicina rigenerativa. Considerando che le cellule staminali sono noti per essere sicuri e sono stati utilizzati clinicamente per molti anni, come trapianto di midollo osseo. Molti pazienti hanno già beneficiato del trattamento. Autologhe cellule staminali adulte sono cellule ancora preferite per il trapianto. Pertanto, le facilmente accessibili ed espandibile cellule staminali adulte in pelle umana / follicoli piliferi sono una fonte preziosa per la medicina rigenerativa.
I metodi di isolamento e la coltura di cellule di cui sono riproducibili e robusti. Abbiamo generato NCSCs da decine di persone in una vasta gamma di età. Anche se è meglio per elaborare il tessuto subito dopo la raccolta del tessuto, abbiamo scoperto che i tessuti del cuoio capelluto può essere immagazzinato in modo sicuro nei media sul ghiaccio per il trasporto durante la notte con un impatto minimo sulla vitalità cellulare.
È importante per trattare il tessuto cuoio capelluto con ant…
The authors have nothing to disclose.
Questo lavoro è sostenuto da NIH sovvenzione R01AR054593 e R01AR054593-S1 a Xu.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
DMEM | Invitrogen | 11965-092 |
DMEM/F12 | Invitrogen | 11330-32 |
Heat-inactivated FBS | Hyclone | SH30071.03 |
B27 supplement | Invitrogen | 17504044 |
N2 supplement | Invitrogen | 17502048 |
bFGF | Invitrogen | PHG0026 |
EGF | R&D system | 236-EG-01M |
IGF-I | R&D system | 291-G1-050 |
0.05% Trypsin/EDTA | Invitrogen | 25300-054 |
Dispase | Invitrogen | 17105041 |
Penicillin-Streptomycin | Invitrogen | 15070063 |
Table 1.