En<em> In vivo</em> Dissekering av den vuxna<em> Drosophila</em> Ventrala nerv sladd (VNC) är påvisas. Denna speciella dissekeringsmetod orsakar små skador på VNC låta den efterföljande märkning av jätten fiber nervceller med fluorescerande färg för hög upplösning.
Att analysera axonal och dendritiska morfologi av nervceller, är det viktigt att få en korrekt märkning av neuronala strukturer. Förbereda väl märkta prover med liten eller ingen vävnadsskada ger oss möjlighet att analysera cellmorfologin och jämföra enskilda prover med varandra, därav det möjligt att identifiera mutant anomalier.
I den visade dissekeringsmetoden nervsystemet är mest inne i vuxen flyga. Genom en dorsal snitt, är buken och bröstkorgen öppnas och de flesta av de inre organen tas bort. Endast ryggsidan av den ventrala nerv sladd (VNC) och livmoderhalscancer bindväv (CVC) som innehåller den stora axoner i den gigantiska fibrer (GF) 1 är utsatta, medan hjärnan som innehåller GF cellkroppen och dendriter återstår 2 i den intakta huvudet . I denna beredning flesta nerver av VNC bör sitta kvar sina muskler.
Efter dissektion, är den intracellulära fyllning av jätten fiber (GF) med en fluorescerande färg påvisas. I CVC GF axoner finns vid rygg-ytan och därmed lätt kan visualiseras i mikroskop med differential interferens kontrast (DIC) optik. Detta gör att injektionen av GF axoner med färg på denna webbplats för att märka hela GF inklusive axoner och deras terminaler i VNC. Metoden ger pålitlig och stark färgning av GF låta nervceller som ska avbildas direkt efter påfyllning av en epifluorescent mikroskop. Alternativt kan fluorescerande signalen förstärkas med hjälp av vanliga immunhistokemi procedurer 3 lämpar sig för hög upplösning konfokalmikroskopi.
Nervsystemet kan dissekeras utan att ta bort det från flugan kroppen. Detta har två fördelar, först orsakar dissektion små skador på nervsystemet, och för det andra, de flesta nerverna vara kopplad till muskler och sinnesorgan. Utföra dissekering, enligt beskrivningen, förbereder provet för rakt fram dye-märkning av GF. Bekvämt, de motoneurons postsynaptiska till GF förbli anslutna till musklerna. Axoner, därför är oskadade, hålla nervceller vid liv längre. Dessutom är skador på nervsystemet kommer a…
The authors have nothing to disclose.
Projektet beskrivs stöddes av licensnummer R01HD050725 från National Institute of Child Health and Human Development för att märka innehållet är uteslutande ansvarig för författare och inte nödvändigtvis representerar officiella ståndpunkter National Institute of Child Health och Human Development eller National Institutes of Health. Vi tackar medlemmar Godenschwege labbet samt Barbara Schreader för deras bidrag till manuskriptet och video.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
---|---|---|---|
Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | ||
Dissection Microscope | AmScope | SM-2TZ | |
Vannas Scissors Superfine | Academic Instruments | VS1023 | |
Dumont Forceps Dumontstar 55 | Fine Science Tools | 11295-51 | |
Austerlitz Insect pins | Fine Science Tools | 26002-10 | Ø 0.1mm |
Borosilicate Glass Electrodes | World Precision Instruments | 1B100F-4 | |
Vertical Pipette Puller 700c | David Kopf Instruments | Model 700C | |
Lucifer Yellow CH dilithium salt | Sigma | L0259 | 1% in H2O |
Fixed Stage Upright Microscope & Camera | Nikon | FN-1 & DS-U2 Camera | |
Plan Fluor 10X Air Objective | Nikon | CFI Plan Fluor 10X NA 0.3 WD 16mm | |
Fluor 40X water dipping Objective | Nikon | CFI Fluor 40X W NA 0.80 WD 2.0mm | |
3D hydraulic Micromanipulator | Narishige International | Model MW0-3 | |
Amplifier | Getting Instruments, Inc. | Model 5A |