쥐 장간막의 Angiogenesis 분석
Summary
physiologic angiogenesis 그 부족 일반 성인 vascularized 포유류의 조직은 학습하는 데 사용됩니다 수술 개입에 노출되지 않았습니다 (I) 개시 및 시험 요원의 intraperitoneal 관리 다음 angiogenesis의 개발, 그리고 체계적인 관리 아래와 angiogenesis의 (2) 수정 테스트 에이전트를 선택했습니다.
Abstract
성인 쥐 장간막 창 angiogenesis 분석은 생물학적으로 적합하고 매우 잘 생체내에 angiogenesis를 돋아의 연구에 적합, 인간 종양이 아닌 종양 조직에서 angiogenesis의 지배 형태로 초대 검토에서 논의 [검토 서류를 참조] 서류 1,2. 프로 angiogenic 요인의 intraperitoneal (IP) 주입에 의해 막의 mesenteric 부품에 유도 Angiogenesis은 피하 (SC), 정맥 주사 (IV) 또는 구두 (PO) 선택 수정 에이전트와 치료에 의해 변조된 수 있습니다. 장간막의 각 막의 부분은 그것을 윈도우와 같은 외관을주는 반투명 및 지방 조직에 의해 누명을 것입니다.
분석은 다음과 유리한 특징이 있습니다 (I) 시험 조직 띄엄띄엄이라도 기본적으로 vascularized이며, 매우 얇은이기 때문에, microvessel 네트워크는 전체 네트워크가 현장에서 미세 평가 수있는, 거의 2 차원이며 ( II) 성인 쥐에서 테스트 조직은 대부분의 정상 성인 포유 동물 조직을 특징 짓는 중요한 physiologic angiogenesis를 부족, 기본 vascularization의 정도는, 그러나, 같은 1 논의 나이 상관이며 외상에서 비롯된 angiogenesis의 (3) 무시할 수준 높은 감도를 보장하며, angiogenesis – modulating 시험 약물이 systemically 실시하고 응답이 모든 신진 대사, 세포, 그리고 치료에 의해 유도된 분자 변경의 네트워크 효과를 반영 관찰 그대로 (4) 분석은 임상 상황을 복제, (V) 분석은이를 복용 효과와 분자 구조 – 활동 관계의 강력한 통계 분석 기능을 활성화뿐만 아니라 돋아 모세관의로, microvascular 공간 확장, 밀도 및 네트워크 패턴 형성의 목적, 양적, 편견 변수의 평가를 허용하며, (VI 성인 쥐가 견고하게 성장 등) 분석은 physiologic 바디 – 체중 증가의 감소 속도 측면에서 높은 감도와 함께 치료의 독성이나 유해한 효과를 보여줍니다.
마스트 세포 – 매개 angiogenesis는 먼저 분석 3,4을 사용하여 시연했다. 모델은 복용량 – 효과 관계와 포함하여 systemically 화학적 또는 기능 관리 밀접한 관련이 약물과 단백질의 측정 효과에 대한 차별의 높은 수준을 보여줍니다 : (I) 낮은 복용량, metronomically 다양한 마약 관련 효과를 얻을 표준 chemotherapeutics을 관리 (즉, angiogenesis – 진압, 중성 또는 angiogenesis – 자극 활동 5), (2) 억제 VEGF – A – 중재 angiogenesis 6 자극 천연 철분 불포화 인간 락토페린, 자연 철 – 불포화 소 락토페린, VEGF – A – 중재 angiogenesis 7, 그리고 (iii) 여러 가지 방법 8,9에 의해 만들어진 낮은 분자 – 중량 헤파린의 분수. 또한, 분석은 높은 동시 또는 순차적 방식으로 systemically 관리되는 에이전트의 angiogenesis에 결합 효과의 연구에 적합합니다.
그가 우리 연구실을 방문하여 설명하는 방법론을 목격 때이 비디오를 만드는 아이디어는 후반 박사 유다 Folkman에서 유래.
리뷰 논문 (초대) 토론과 분석을 평가
angiogenesis의 생체내 모델에 Norrby, K.. J. 셀. 몰. 메드. 10, 588-612 (2006).
Norrby, angiogenesis 모델 K. 약물 테스트. 전문가 Opin. 약물. Discov. 3, 533-549 (2008).
Protocol
Discussion
분석은 1986 3 도입되었으며 연속 더욱 개발하고 우리 연구실 7,10-12에서 세련되었습니다. 으로 검토 서류 (초대) 1, 2에서 논의, 분석, 특히 같은 성인 테스트 조직과 같은 중요한 기능에 관해서는 생체내의 angiogenesis 분석의 다른 포유 동물과 잘 비교 기본적으로 vascularized하고 physiologic angiogenesis 부족, 최소한의 외상있는 경우입니다 조직에 쏜, 진정으로 양적 변수는 측정, 투약 – 반응과 분자 – 활동 연구에 관한 소리가 통계 분석을 허용하는, 돋아 angiogenesis는 정상 조직과 종양에 predominating되는 발생 및 독성 데이터는 쉽게 견고하게 성장 쥐에 축적 아르 생리학 성인 인치 이 생쥐에 대한 거의 적합 것을하고, 그것이 real-time/serial 관찰을 허용하지 않는, 불리한 기능은 개별 microvessel 세그먼트와 microvessel 콩나물의 수와 길이를 평가 특히 분석은 비교적 시간이 많이 걸리는있다는 사실을 포함할 수 생쥐 많은 mesenteric Windows가 잠재적인 부모 microvessels 부족 이후 새로운 모세 혈관이 발생한 수있는.
실시간 관찰은, 그러나 동물로 1 anesthetized 논의 중에 exteriorized지만 그대로 mesenteric Windows가 현미경 단계에 걸쳐 splayed 아르 intravital 현미경으로 활성화되어 있습니다.
angiogenesis 연구에 큰 진보는 그러한 유용하지만, 궁극적으로 제한 도구 각막 micropocket, 병아리, chorioallantoic 막, 그리고 SC Matrigel 플러그 assays, 같은 모델을 사용하여 과거 수십 년간에 달성되었습니다. 안티 angiogenic 및 프로 angiogenic 요법의 미래 임상 응용 프로그램은 설치와 같은 현재의 보고서에서 설명한 것과 같이 더 민감하고 생물학 관련, 정말 양적 사전 임상 모델의 유효성 검사를 할거에요.
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
연구의 대부분에 대한 재정 지원은 스웨덴의 의학 연구 협의회 (부여 5942)에 의해 제공되었다.
Materials
Buffers and reagents
0.5 M Tris-HCl (pH 7.8) stock solution
Tris (hydroxymethyl) aminomethan (60.57 g) is dissolved in ~900 ml aqua dest and ~45 ml of 25% HCl (concentrated) is added to achieve pH 7.8 followed by dilution to 1 liter with aqua dest.
Tris-buffer saline (TBS; pH 7.8)
To 200 ml of the stock solution is added 18 g NaCl dissolved in ~1800 ml aqua dest with adjustment of pH to 7.8 using the stock solution, followed by dilution to 2 liter with aqua dest.
TBS (pH 7.4)
To 200 ml of the stock solution is added 18 g NaCl dissolved in dissolved in ~1800 ml aqua dest with adjustment of pH to 7.4 using the stock solution, followed by dilution to 2 liter with aqua dest.
Trypsin solution (0.05% trypsin, 0.1% CaCl2)
Contains 0.1 g trypsin and 0.2 g CaCl2 in 200 ml TBS (pH 7.8).
Sucrose solution 2.5%
Contains 5 g sucrose in 200 ml TBS (pH 7.8).
Stock solution of 1% Sodium azide in TBS (pH 7.4)
Contains 1 g Na-azide in 100 ml with TBS (pH 7.4).
Diluting buffer: 0.1% BSA, 0.01% Na-azide
(Used to dilute antibodies in the Vectastain ABC kit). Contains 0.1 g bovine serum albumin (BSA) and 1 ml of 1% Na-azide, diluted to 100 ml with TBS (pH 7.4).
ABC kit Vectastain PK 4002, ABC peroxidase mouse IgG
Normal horse serum; blocking serum; yellow solution: 3 drops/10 ml dilution buffer.
Biotinylated antibody; anti-mouse IgG; blue solution: 1 drop/10 ml dilution buffer.
ABC-reagent: orange solution, 2 drops plus brown solution 2 drops/10 ml TBS (pH 7.4).
Mix these solutions 20 minutes before use!
Mouse (monoclonal) anti-rat endothelium(Biosource International, Camarillo, CA, U.S.A.)
| Catalog # | ARU0181 |
| Clone # | MRC OX-43 |
This antibody is directed against all vascular endothelial cells in the rat, with the exception of those in the brain.
Vectastain peroxidase Avidin Biotin Complex (ABC) kit
The kit contains primary antibody, biotinylated secondary antibody, avidin-biotinylated enzyme complex (ABC), and enzyme substrate. See www.vectorlabs.com or www.immunkemi.se for protocols.
Bovine serum albumin(BSA) (Sigma-Aldrich, catalog # A-4503).
DAB= 3,3′-Diaminobenzidine Isopac (Sigma-Aldrich, catalog # D 9015).
Trypsinfrom Bovine Pancreas (Sigma-Aldrich, catalog # T 4665).
Vectastain peroxidase ABC-kit, Mouse IgG (Immunkemi F & D AB, Jarfalla, Sweden)
Referencias
- Norrby, K. In vivo models of angiogenesis. J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).
- Norrby, K. Drug testing with angiogenesis models. Expert Opin. Drug. Discov. 3, 533-549 (2008).
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- Albertsson, P., Lennernas, B., Norrby, K. On meteronomic chemotherapy: modulation of angiogenesis mediated by VEGF-A. Acta Oncol. 45, 144-155 (2006).
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