Фаллопиевых труб (FT) появляется в качестве альтернативного места происхождения для серозного рака яичников (SOC). Этот протокол описывает новый метод для изоляции и<em> Исключая виво</em> Культура маточной трубе эпителиальных клеток. Эта система повторяет<em> В естественных условиях</em> Эпителия и позволяет изучение патогенеза SOC.
Эпителиального рака яичников является одной из главных причин женской смертности от рака в Соединенных Штатах. В отличие от других женщин-специфические виды рака, как и рака молочной железы и матки рак, где показатели смертности снизились в последние годы, яичников ставки лечения рака остаются относительно неизменными в течение последних двух десятилетий 1. Во многом это связано с отсутствием соответствующих инструментов скрининга для выявления ранних стадия заболевания, когда хирургическое вмешательство и химиотерапия являются наиболее эффективными 2, 3. В результате, большинство пациентов имеет продвинутые стадии заболевания и диффузного брюшной участия. Это осложняется еще и тем, что рак яичников является гетерогенным заболеванием с несколькими гистологических подтипов 4, 5. Серозный рак яичников (ШОС) является наиболее распространенным и агрессивный подтип и вид чаще всего связан с мутациями в генах BRCA. Современные экспериментальные модели в этой области связаны с использованием клеточных линий рака и мышах, чтобы лучше понять генетические события начала и патогенеза заболевания 6, 7. В последнее время маточной трубе появился как роман сайт для возникновения ШОС, с маточной трубе (FT) секреторная эпителиальные клетки (FTSEC) в качестве предлагаемой ячейки 8 происхождения, 9. Есть в настоящее время нет клеточных линий или культура систем, доступных для изучения эпителия FT или FTSEC. Здесь мы опишем естественных роман бывшего культуры система, где первичные человеческие FT эпителиальные клетки культивируют в манере, которая сохраняет свою архитектуру, полярность, иммунофенотип, и ответ на физиологические и генотоксического стресса. Это бывшие модели естественных условиях представляет собой полезный инструмент для изучения ШОС, что позволит лучше понять, как опухоли могут возникнуть из этой ткани, а также механизмы, участвующие в опухоли инициации и прогрессии.
Идентификация FT в качестве кандидата сайта происхождения SOC предоставляет возможность для основной и трансляционные исследования, направленные на расшифровку механизмы, связывающие известные факторы риска и фактических серозного канцерогенный процесс. Критические для этого является развитие послушный модельные системы, которая позволит нам приступить к тестированию гипотезы, что FTSEC является клетка-оф-происхождения тазовых серозных опухолях. Бывшие модели культуры естественных условиях, описанных здесь является новая система, которая позволяет изоляции и со-культуре первичных секреторной FT и ресничные клетки таким образом, что сохраняет морфологию и биологию родной эпителия FT. Используя эту систему, мы в последнее время характеризуется secretome этого эпителия и как эпителий реагирует на механические и генотоксического травмы 10. Овуляция, одним из основных факторов риска, связанных с яичников опухолей, характеризуется сочетанием повреждения тканей, воспалительные медиаторы, факторы роста, гормоны и 11. Эта система может быть использована для изучения влияния среды на овуляторных реагирования и жизнеспособность секреторную и ресничных клеток. Кроме того, влияние других типов клеток (т.е. клеток воспаления) могут быть изучены, чтобы лучше понять события, диск камерного типа дифференциации и факторов, которые способствуют опухолевой трансформации этих клеток. Подобные модели были описаны в других тканях, где поляризованных эпителия присутствует. Например, в поляризованном первичных культур дыхательных путей эпителия, эффект heregulin на рост клеток и ответ на повреждение клеток оценивали 12. Эти типы моделей системы предоставляют новые и полезный способ исследования инициирования и патогенеза опухолей, которые возникают из эпителиальных тканей, и это имеет решающее значение в тканях, таких как FT, где нет линий клеток в настоящее время существуют, и где есть большой необходимость определения основных путей и разработка новых стратегий лечения.
The authors have nothing to disclose.
Мы благодарим факультет, ребята, жители, и врач помощников Бригам и женской больницы, отделении патологии для изготовления ткани для этих исследований. Эта работа была поддержана исследовательских грантов от NIH / Национальный институт рака (P50 CA105009, K08 CA108748, U01 CA152990), рак яичников Исследования фонда, Фонда мая Кей, Novartis Pharmaceuticals, Роберт и Дебора Первый фонд, Рэнди и Джоэл Катлер рака яичников Исследования Фонда, Марша Ривкин Foundation – научного премии Scholar, AACR – Джордж и Патрисия Sehl стипендий для Рака генетики исследований и стипендий Американского врача по медицине в Израиле – Клэр и Эммануэль Г. Розенблатт Фонда Грант.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Collagen from human placenta (Bornstein and Traub Type IV) | Sigma | C7521 | ||
DMEM:F12 media | Cellgro | 15-090-CV | ||
Ultroser G | Crescent Chemical Company | 67042 | Add 20 ml of DMEM:F12 to stock bottle and use 10mls per 500 ml of media (2% final concentration) | |
Pen Strep | Invitrogen | 15140-122 | ||
BD Primaria culture plates | BD Bioscience | 353802 | ||
24 well Transwell Permeable supports | Corning (Costar) | 3470 | Clear, 6.5 mm insert, 0.4 μm pore size, treated polyester | |
MEM (Minimal Essential Media) | Cellgro | 10-010-CV | ||
Pronase | Roche | 11459643001 | ||
DNAse | Sigma | DN25 | ||
Sall2 antibody | Dr T. Benjamin, Harvard | Gift | 1:20 dilution | |
Pax8 antibody | Proteintech | 10336-1-AP | 1: 1000 dilution |