La trompa de Falopio (FT) se está convirtiendo en un sitio alternativo de origen para el carcinoma de ovario seroso (SOC). Este protocolo describe un nuevo método para el aislamiento y<em> Ex vivo</em> Cultivo de células epiteliales del tubo de Falopio. Este recapitula el sistema<em> In vivo</emEpitelio> y permite el estudio de la patogénesis del SOC.
Cáncer epitelial de ovario es la principal causa de mortalidad por cáncer de mujeres en los Estados Unidos. A diferencia de otros específicos para las mujeres el cáncer, como carcinomas de mama y útero, donde las tasas de mortalidad han disminuido en los últimos años, las tasas de curación del cáncer de ovario se han mantenido relativamente sin cambios durante las últimas dos décadas 1. Esto se debe principalmente a la falta de herramientas de evaluación adecuadas para la detección de la enfermedad en etapa temprana, cuando la cirugía y la quimioterapia son más eficaces 2, 3. Como resultado, la mayoría de los pacientes se presentan con enfermedad en estadio avanzado y la participación abdominal difuso. Esto se complica aún más por el hecho de que el cáncer de ovario es una enfermedad heterogénea con múltiples subtipos histológicos 4, 5. El carcinoma de ovario seroso (SOC) es el subtipo más común y agresiva y la forma más frecuentemente asociada con mutaciones en los genes BRCA. Los actuales modelos experimentales en este campo incluyen el uso de líneas celulares de cáncer y los modelos de ratón para comprender mejor los sucesos iniciadores genética y la patogénesis de la enfermedad de 6, 7. Recientemente, la trompa de Falopio se ha convertido en un nuevo sitio para el origen del SOC, con la trompa de Falopio (FT) de células epiteliales secretoras (FTSEC) como la célula de origen propuesta 8, 9. Actualmente no hay líneas celulares o sistemas de cultivo disponible para estudiar el epitelio FT o la FTSEC. Aquí se describe una nueva ex vivo sistema de cultivo en células primarias de FT epiteliales humanas se cultivan de manera que conserve su arquitectura, la polaridad, inmunofenotipo, y la respuesta al estrés fisiológico y genotóxicos. Este modelo ex vivo es una herramienta útil para el estudio del SOC, lo que permite una mejor comprensión de cómo los tumores pueden surgir de este tejido, y los mecanismos implicados en la iniciación y progresión del tumor.
La identificación de la FT como un sitio candidato de origen para el SOC ofrece la oportunidad de la investigación básica y translacional orientada a descifrar los mecanismos que vinculan factores de riesgo conocidos y el actual proceso carcinogénico serosa. Crítico de esto es el desarrollo de sistemas modelo manejable que nos permitirá comenzar a probar la hipótesis de que la FTSEC es una célula de origen de la pelvis carcinomas serosos. El modelo in vivo la cultura ex descritos en este documento es un novedoso sistema que permite el aislamiento y la co-cultura de la secreción FT primario y las células ciliadas de una manera que preserva la morfología y la biología del epitelio FT nativo. El uso de este sistema, caracterizado recientemente secretoma de este epitelio y la forma en que el epitelio responde a daños mecánicos y genotóxico 10. La ovulación, un factor de riesgo más importantes asociados con la tumorigénesis de ovario, se caracteriza por una combinación de lesión de los tejidos, los mediadores inflamatorios, factores de crecimiento y hormonas 11. Este sistema podría ser utilizado para estudiar el efecto de un medio de ovulación en la respuesta y la viabilidad de las células ciliadas y secretoras. Además, el impacto de otros tipos de células (es decir, células inflamatorias) podría ser examinado para permitir una mejor comprensión de los acontecimientos que conducen a la celda de tipo de diferenciación y los factores que contribuyen a la transformación neoplásica de estas células. Modelos similares han sido descritos en otros tejidos en el epitelio polarizado está presente. Por ejemplo, en el polarizado cultivos primarios de epitelio de las vías, el efecto de herregulina sobre el crecimiento celular y la respuesta al daño celular se evaluó 12. Estos tipos de sistemas de modelos proporcionan una manera nueva y útil para estudiar el inicio y la patogénesis de los tumores que se derivan de los tejidos epiteliales, y esto es de vital importancia en los tejidos, como el Financial Times, donde no hay líneas de células existen en la actualidad, y donde hay una gran necesidad de la identificación de las principales vías y el desarrollo de nuevas estrategias de tratamiento.
The authors have nothing to disclose.
Agradecemos a los profesores, becarios, residentes y médicos asistentes del Hospital Brigham y de Mujeres, Departamento de Patología para la fabricación de tejido disponible para estos estudios. Este trabajo fue apoyado por becas de investigación del Instituto de NIH / Nacional del Cáncer (P50 CA105009, K08 CA108748, CA152990 U01), el cáncer de ovario Fondo de Investigación, la Fundación de mayo de Kay, Novartis Pharmaceuticals, Robert y Deborah primer Fondo, Randi y Joel Cutler cáncer de ovario Fondo de Investigación, Marsha Rivkin Fundación – Premio Académico Científico, AACR – Jorge y Patricia Sehl de Becas para la Investigación de Genética del Cáncer y la Comunidad Médico Estadounidense de Medicina en Israel – Claire y Emmanuel G. Rosenblatt beca de la Fundación.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Collagen from human placenta (Bornstein and Traub Type IV) | Sigma | C7521 | ||
DMEM:F12 media | Cellgro | 15-090-CV | ||
Ultroser G | Crescent Chemical Company | 67042 | Add 20 ml of DMEM:F12 to stock bottle and use 10mls per 500 ml of media (2% final concentration) | |
Pen Strep | Invitrogen | 15140-122 | ||
BD Primaria culture plates | BD Bioscience | 353802 | ||
24 well Transwell Permeable supports | Corning (Costar) | 3470 | Clear, 6.5 mm insert, 0.4 μm pore size, treated polyester | |
MEM (Minimal Essential Media) | Cellgro | 10-010-CV | ||
Pronase | Roche | 11459643001 | ||
DNAse | Sigma | DN25 | ||
Sall2 antibody | Dr T. Benjamin, Harvard | Gift | 1:20 dilution | |
Pax8 antibody | Proteintech | 10336-1-AP | 1: 1000 dilution |