تعديل الجذعية الجنينية الماوس الفحص خلية مقرها لقياس كفاءة قلبية التعريفي
Summary
نحن تصف استخدام خلية مقايسة الماوس ES يستند إلى تحديد النوافذ وقت حرج بالنسبة لcatenin – β Wnt / BMP وتفعيل إشارة قلبية خلال الاستقراء. الأسلوب يوفر منصة موحدة يحدد مقدار الكفاءة موثوق قلبية ، وأنه قابل للتطبيق لدراسة الأنساب خلية أخرى.
Abstract
وتخضع لرقابة صارمة من تمايز الخلايا الجذعية المحفزة عن طريق التنظيم الزماني والمكاني لمسارات رئيسية متعددة الإشارة. وقد كانت واحدة من العقبات التي تعترض سبيل فهمها أساليب متنوعة في ربط التغيرات في الأحداث الرئيسية يشير إلى كفاءة التمايز. نحن هنا وصف استخدام الماوس مقايسة الخلايا الجذعية الجنينية (ES) استنادا إلى تحديد وقت حرج بالنسبة لنوافذ catenin – β Wnt / BMP وتفعيل إشارة قلبية خلال الاستقراء. بتسجيله للتعاقد الهيئات الجنينية (EBS) في شكل لوحة 96 – جيدا ، يمكننا قياس كفاءة قلبية بسرعة وتحديد النوافذ وقت حاسم بالنسبة لcatenin – β Wnt / BMP وتفعيل دورة في إشارة الزمنية التالية المغير علاجات محددة. لا يقتصر الرئيسية الواردة هنا لتحريض القلب وحده ، ويمكن تطبيقها من أجل دراسة العديد من الأنساب خلية أخرى. بالإضافة إلى ذلك ، شكل 96 – جيدا لديه القدرة على مزيد من التطوير وإنتاجية عالية ، والفحص الآلي للسماح لاختبار الفرضيات التجريبية أكثر تعقيدا.
Protocol
Discussion
وقد تم إسقاط الأسلوب شنقا في الطريقة التقليدية المستخدمة لتشكيل المجلس التنفيذي والتمايز في المختبر. ومع ذلك ، فإنه أمر شاق وحدود المرونة التجريبية بسبب المخاوف اللوجيستية. وعلى نفس المنوال ، والنتائج هي أيضا أكثر صعوبة التحقق من صحة مثل مهارة المجرب أمر حاسم لتشكيل المجلس التنفيذي الناجح والتلاعب وقطرات شنقا. وأبسط طريقة لشكل EBS في صفيحة مستديرة القاع 96 وكذلك في عملية واحدة خطوة. يسمح هذا التنسيق في المختبر لتمايز تكون موحدة ، ويمكن أن تستوعب أكثر الظروف التجريبية نظرا لسهولة تشكيل المجلس التنفيذي والتلاعب المصب (مثل إضافة أو إزالة المغير). وعلاوة على ذلك ، يمكن أن يكون الأمثل لل96 – جيدا شكل لوحة لتكون أداة فعالة في فحص خلايا ES الماوس.
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة وشؤون المحاربين القدامى والمنح 5U01HL100398 1R01HL104040.
Materials
- Mouse CGR8 cells are mainly used.
- ES medium: GMEM media supplemented with 10% heat-inactivated FBS, 2 mM L-glutamine, 0.05 mM 2-mercaptoethanol, and 200 U/ml murine LIF.
- EB medium: Prepare IMDM media with 20% heat-inactivated FBS, 1.6 mM L-glutamine, 0.08 mM 2-mercaptoethanol, and 1X MEM Non-essential amino acid solution.
Referencias
- Fukuda, K., Yuasa, S. Stem cells as a source of regenerative cardiomyocytes. Circulation research. 98, 1002-1013 (2006).
- Foley, A. C., Mercola, M. Heart induction by Wnt antagonists depends on the homeodomain transcription factor Hex. Genes Dev. 19, 387-396 (2005).
- Naito, A. T., Shiojima, I., Akazawa, H., Hidaka, K., Morisaki, T., Kikuchi, A., Komuro, I. Developmental stage-specific biphasic roles of Wnt/beta-catenin signaling in cardiomyogenesis and hematopoiesis. Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 19812-19817 (2006).
- Hao, J., Daleo, M. A., Murphy, C. K., Yu, P. B., Ho, J. N., Hu, J., Peterson, R. T., Hatzopoulos, A. K., Hong, C. C. Dorsomorphin, a selective small molecule inhibitor of BMP signaling, promotes cardiomyogenesis in embryonic stem cells. PloS one. 3, e2904-e2904 (2008).
