Cultura organotípicas de Full-espessura Retina Porcina Adulto
Summary
Aqui nós descrevemos uma técnica de custo-benefício para a cultura de retina organotípicas suína adulto por sete dias. Resumidamente, um papel estéril filtro foi utilizado para levantar a retina neural fora do RPE e do lado coloque fotorreceptoras em cima uma inserção levantadas por um carrinho feito por encomenda.
Abstract
Há uma demanda reconhecida por modelos de vitro que podem substituir ou reduzir a experimentação animal. Retina suína tem uma estrutura semelhante neuronal a retina humana e, portanto, uma espécie valiosa para estudar mecanismos de lesão da retina humana e doenças degenerativas. Aqui nós descrevemos uma técnica de custo-benefício para a cultura de retina organotípicas suína adulto isolado de olhos obtido a partir de um matadouro. Após a remoção do segmento anterior, uma lâmina de trépano foi usado para criar múltiplas retina neural-Bruch membrana-RPE-coróide esclera-explantes do segmento posterior de olhos de porco adulto. Um pedaço de papel filtro estéril foi utilizada para levantar a retina neural off de cada explante. O complexo de papel-filtro retina foi cultivado (lado fotorreceptor para cima) em cima de uma inserção, que foi realizada longe do fundo do prato de cultura por um carrinho feito por encomenda. O stand permite uma boa circulação do meio de cultura para ambos os lados da retina. Globalmente, este procedimento é simples, reprodutível e permite a preservação da estrutura da retina nativo para pelo menos sete dias, tornando-se um modelo útil para uma variedade de estudos morfológicos, farmacológicos e bioquímicos na retina de mamíferos.
Protocol
Discussion
Pesquisadores visão criaram uma variedade de sistemas de cultura da retina, incluindo sistemas de organotípicas, para estudar uma variedade de questões, tais como o transplante de células-tronco da retina 1, a regeneração da retina 2, e expressão de genes exógenos 3-5. No entanto, a retina de mamíferos adultos é difícil manter in vitro, principalmente devido à alta demanda de energia dos 6 fotorreceptores. Koizumi et al. Descrito um sistema de cul…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado pelo NIH conceder EY 012.031 (ET-A), um prêmio da Fundação FM Kirby (ET-A), para prevenir a cegueira Research, Inc. (MAZ), The New Jersey Lions Eye Research Foundation (MAZ), O Instituto Eye of New Jersey (MAZ), o J. Joseph e Marguerite Retina DiSepio Research Fund (MAZ), eo Vassar e Janice Mitchell Mitchell Ashby Clube (AMK).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| MEM | Invitrogen-Gibco | 10370-021 | |
| 5 mL pipette tip | ISC BioExpress | P-3250-19 | |
| NUNC cell culture insert | Thermal | 137443 | 8μm, Polycarbonate |
| Whatman 4M Filter paper | Whatman | 1004 | |
| DMEM | Cellgro-mediatech Inc | 10-013-CV | |
| Agar | Fluka | 05040 | |
| Fungizone Amphotericin B | Invitrogen-Gibco | 15290018 | |
| Trephine blades | Bausch and Lomb | T3096 | 6.00mm |
| O.C.T. Compound | Electron Microscopy Sciences | 62550-01 | 4583 |
| Sciences | |||
| Cryostat | Leica | CM1900 | |
| Vibratome | Leica | Series 1000 | |
| Confocal microscopy; | Carl Zeiss | LSM510 | |
| Anti-Synaptic Vesicle Protein 2 (SV2) mouse monoclonal antibody | DSHB | N/A | |
| Anti-Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) polyclonal rabbit antibody | DAKO | DAKO | |
| Propidium Iodide (PI) | Sigma | P4170 |
Referencias
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