전체 두께 성인 돼지의의 망막의 Organotypic 문화
Summary
여기 우리는 일주일 동안 성인 돼지의의 망막의 organotypic 문화 비용 효율적인 기술을 설명합니다. 간단히, 멸균 여과지는 맞춤 제작 스탠드 제기 삽입에 RPE 및 장소 photoreceptor 사이드 최대의 신경 망막 떠 사용되었습니다.
Abstract
동물 실험을 바꾸거나 줄일 수 있습니다 체외 모델에 대한 인식 수요가있다. 돼지의의 망막은 인간의 망막과 유사한 구조의 연결을 가지고 있으며, 따라서 인간의 망막 부상 퇴행성 질병의 메커니즘을 연구에 대한 가치있는 수종입니다. 여기서 우리는 도살장에서 얻은 눈에에서 분리된 돼지의 성인의 망막의 organotypic 문화 비용 효율적인 기술을 설명합니다. 앞쪽에 세그먼트를 제거 후 trephine 블레이드는 성인 돼지의 눈을의 후부 세그먼트에서 여러 신경 망막 – Bruch의 막이 – RPE – 맥락막 – 공막엔의 explants를 만드는 데 사용되었다. 무균 필터 종이 각 explant에서 신경 망막 떠 사용되었습니다. 필터 종이 망막 복합은 맞춤 제작 스탠드로 문화 접시의 바닥에서 거리가 개최되었습니다 삽입, 위에 (최대 photoreceptor 사이드) 교양되었습니다. 스탠드는 망막의 양쪽에 문화 매체를 잘 순환 수 있습니다. 전반적으로,이 절차는 재현성, 간단하고, 적어도 7 일 동안 기본 망막 구조의 보존을 허용, 그것 포유 동물 망막에서 형태학의 약리 및 생화학 연구의 다양한 유용 모델 만들기.
Protocol
Discussion
비전 연구자는 망막 줄기 세포 이식 1, 망막 재생 2, 외인성 유전자 발현 3-5로 문제의 다양한 연구를 organotypic 시스템을 포함한 망막 문화 시스템의 다양한 설립했습니다. 그러나, 성인 포유류의 망막은 체외에서 photoreceptors 6 높은 에너지 요구에 주로 인해 유지하기 어렵습니다. 고이즈미 외가. photoreceptors에 대한 산소 공급이 문화 삽입의 높이를 제기?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 NIH 교부금 어이 012,031 (동부 표준시 – A), 실명, 주식 회사 (MAZ), 뉴저지 라이온스 안구 연구 재단 (MAZ)을 방지하기 위해 FM 커비 재단 (동부 표준시 – A), 연구에서 수상에 의해 지원되었다 뉴저지 (MAZ), 조셉 J.와 마거리트 DiSepio 망막 연구 기금 (MAZ)와 재니스 미첼 바사르 및 애쉬비 미첼 원정대 (AMK)의 아이 연구소.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| MEM | Invitrogen-Gibco | 10370-021 | |
| 5 mL pipette tip | ISC BioExpress | P-3250-19 | |
| NUNC cell culture insert | Thermal | 137443 | 8μm, Polycarbonate |
| Whatman 4M Filter paper | Whatman | 1004 | |
| DMEM | Cellgro-mediatech Inc | 10-013-CV | |
| Agar | Fluka | 05040 | |
| Fungizone Amphotericin B | Invitrogen-Gibco | 15290018 | |
| Trephine blades | Bausch and Lomb | T3096 | 6.00mm |
| O.C.T. Compound | Electron Microscopy Sciences | 62550-01 | 4583 |
| Sciences | |||
| Cryostat | Leica | CM1900 | |
| Vibratome | Leica | Series 1000 | |
| Confocal microscopy; | Carl Zeiss | LSM510 | |
| Anti-Synaptic Vesicle Protein 2 (SV2) mouse monoclonal antibody | DSHB | N/A | |
| Anti-Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) polyclonal rabbit antibody | DAKO | DAKO | |
| Propidium Iodide (PI) | Sigma | P4170 |
Referencias
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