Egzersizle indüklenen Lenfosit Apoptoz belirlenmesi için parmak sopa Kan Örnekleme Metodolojisi
Summary
Egzersiz immün hücrelerinde apopitoz indükleyen yeteneğine sahiptir. Özellikle önce değerlendirilmesi için kan örneği izole etmek ve tedavi etmek için gerekli süreyi ile ilgili çeşitli ölçüm sınırlamaları vardır. Göstermiştir egzersize bağlı lenfosit apoptozis analizi için hızlı ve minimal invaziv bir işlemdir.
Abstract
Egzersiz bağışıklık hücrelerinin apoptozisi indükleyen yeteneğine fizyolojik bir uyarı. Bugüne kadar, özellikle hücre ölümü değerlendirme öncesinde kan örneği izole etmek ve tedavi etmek için gerekli süreyi ile ilgili çeşitli sınırlamalar, bu fenomenin ölçümü ile tespit edilmiştir. Bu nedenle, immün hücre apoptozis artar, sistem üzerinde egzersiz gerçek etkisi katkıda veya bu ölçüm sonunda elde etmek için gerekli zaman ve işleme bir yansıması olup olmadığını belirlemek zordur. Bu yazıda, egzersize bağlı lenfosit apoptozis analizi için hızlı ve minimal invaziv bir prosedür ortaya koymaktadır. Diğer tekniklerin aksine, tam kan, hemen bir örnek elde etmek üzerine bir antikor paneline eklenir. Kuluçka döneminin ardından, kırmızı kan hücrelerinin parçalanmış ve numuneler analiz edilecek hazırız. Bir parmak-stick örnekleme prosedürü kullanmak gerekli kan hacmini azaltır ve konulara rahatsızlığı en aza indirir.
Protocol
Discussion
Minimal invaziv bir örnek toplama işlemi ve sonraki analiz egzersize bağlı lenfosit apoptozis hem erken ve geç faz analizi için gösterilmiştir. Bu açıkça nekrotik ve apoptotik değil bu hücrelerin, dışlamak için de mümkündür. Bu işlem sırasında, önce birden fazla zaman noktalarında antekübital bölgede invaziv venipunktür ile ilgili sakıncaları ve rahatsızlık üstesinden ve egzersizden hemen sonra ya da egzersiz maçın süresi için bir kateter güvence. Araştırmacılar açısından, bu t…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu araştırma, Western Kentucky Üniversitesi'nde Fakülte Burs Konseyi Yeni Bir Fakültesi Grant tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Flow Cytometry Binding Buffer | eBioscience | 00-4222-26 | ||
| RBC Lysis Buffer | eBioscience | 00-4333-57 | ||
| Lancet Device | Accu Check Soft Touch | Roche Diagnostics Corp. | ||
| Capillary tubes | Heparinized Capillary Tubes | Chase Scientific Glass, Inc. | 501 | |
| Centrifuge | GmC Lab | Gilson | PMS-880 | |
| Annexin V-FITC Conjugated | Biovision Inc. | K201-400-1 | ||
| CD4-PE Conjugated | Anti-human, clone RPA-T4 | eBioscience | 12-0049-42 | |
| CD8-PE Conjugated | Anti-human, clone OKT8 | eBioscience | 12-0086-73 | |
| CD19-PE Conjugated | Anti-human, clone HIB19 | eBioscience | 12-0199-42 | |
| 7-AAD Viability Staining Solution | eBioscience | 00-6993-50 | ||
| CD45RA-APC Conjugated | Anti-human, clone HI100 | eBioscience | 17-0458-42 | |
| Flow cytometer | C6 | Accuri |
Referencias
- Simpson, R. J., Florida-James, G. D., Whyte, G. P., Black, J. R., Ross, J. A., Guy, K. Apoptosis does not contribute to the blood lymphocytopenia observed after intensive and downhill treadmill running in humans. Res. Sports Med. 15, 157-174 (2007).
- Steensberg, A., Morrow, J., Toft, A. D., Bruunsgaard, H., Pedersen, B. K. Prolonged exercise, lymphocyte apoptosis and F2-isoprostanes. Eur. J. Appl. Physiol. 87, 38-42 (2002).
- Mooren, F. C., Bloming, D., Lechtermann, A., Lerch, M. M., Völker, K. Lymphocyte apoptosis after exhaustive and moderate exercise. J. Appl. Physiol. 93, 147-153 (2002).
- Peters, E. M., Eden, M. V. a. n., Tyler, N., Ramautar, A., Chutergoon, A. A. Prolonged exercise does not cause lymphocyte DNA damage or increased apoptosis in well-trained endurance athletes. Eur. J. Appl. Physiol. 98, 124-131 (2006).
- Wang, J. -. S., Huang, Y. -. H. Effects of exercise intensity on lymphocyte apoptosis induced by oxidative stress in men. Eur. J. Appl. Physiol. 95, 290-291 (2005).
- Mooren, F. C., Lechtermann, A., Völker, K. Exercise-induced apoptosis of lymphocytes depends on training status. Med. Sci. Sports Exerc. 36, 1476-1483 (2004).
- Navalta, J. W., Sedlock, D. A., Park, K. -. S. Blood treatment influences the yield of apoptotic lymphocytes after maximal exercise. Med. Sci. Sports Exerc. 37, 369-373 (2005).
