Summary

אצבע מקל דגימה דם מתודולוגיה לקביעת אפופטוזיס-תרגיל המושרה הלימפוציטים

Published: February 24, 2011
doi:

Summary

תרגיל מסוגל גרימת מות תאים מתוכנת בתאי המערכת החיסונית. ישנן מגבלות מדידה שונים, בעיקר בנוגע לכמות הזמן הדרוש כדי לבודד ולטפל דגימת דם לפני האבחון. הפגינו הוא הליך מהיר פולשנית לניתוח אפופטוזיס האימון המושרה לימפוציטים.

Abstract

פעילות גופנית היא גירוי פיזיולוגי מסוגל גרימת מות תאים מתוכנת בתאי המערכת החיסונית. עד כה, מגבלות שונות זוהו עם המדידה של תופעה זו, במיוחד בנוגע למשך הזמן הנדרש כדי לבודד ולטפל דגימת דם לפני ההערכה של מוות של תאים. בגלל זה, קשה לקבוע האם עליות דיווח אפופטוזיס תא החיסון ניתן תרמו ההשפעה בפועל של פעילות גופנית על המערכת, או השתקפות של זמן עיבוד צורך בסופו של דבר להשיג את המדידה. במאמר זה אנו מדגימים הליך מהיר פולשנית לניתוח אפופטוזיס האימון המושרה לימפוציטים. שלא כמו טכניקות אחרות, דם כל מתווסף פאנל נוגדן מיד עם קבלת המדגם. לאחר תקופת הדגירה, כדוריות דם אדומות lysed דגימות מוכנים להיות מנותח. השימוש בנוהל אצבע מקל דגימה מקטין את נפח הדם הנדרש, מקטינה את אי נוחות לנבדקים.

Protocol

1. Finger-Stick דם דגימה איסוף דם נלקחת בדרך כלל כל למדידת קו בסיס (בדרך כלל לאחר 10-15 דקות מנוחה בישיבה), במהלך או מיד לאחר התקף התעמלות, לאורך כל התקופה שלאחר האימון במנוחה (בדרך כלל בין 1-3 שעות לאחר הפסקה של תרגיל). <li style=";text-…

Discussion

אוסף פולשנית מדגם הליך ניתוח שלאחר מכן באה לידי ביטוי לניתוח שלבי בשלבים מוקדמים ומאוחרים של אפופטוזיס האימון המושרה לימפוציטים. ניתן גם בבירור לכלול תאים אלה, המהווים נמקי, ולא אפופטוטיים. הליך זה מתגבר על החסרונות ואי נוחות הקשורה venipuncture פולשנית מאזור antecubital בנקוד…

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

מחקר זה מומן על ידי מענק הפקולטה חדש מהמועצה הפקולטה מלגות בבית המערבי אוניברסיטת קנטאקי.

Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
Flow Cytometry Binding Buffer   eBioscience 00-4222-26  
RBC Lysis Buffer   eBioscience 00-4333-57  
Lancet Device Accu Check Soft Touch Roche Diagnostics Corp.    
Capillary tubes Heparinized Capillary Tubes Chase Scientific Glass, Inc. 501  
Centrifuge GmC Lab Gilson PMS-880  
Annexin V-FITC Conjugated   Biovision Inc. K201-400-1  
CD4-PE Conjugated Anti-human, clone RPA-T4 eBioscience 12-0049-42  
CD8-PE Conjugated Anti-human, clone OKT8 eBioscience 12-0086-73  
CD19-PE Conjugated Anti-human, clone HIB19 eBioscience 12-0199-42  
7-AAD Viability Staining Solution   eBioscience 00-6993-50  
CD45RA-APC Conjugated Anti-human, clone HI100 eBioscience 17-0458-42  
Flow cytometer C6 Accuri    

Referencias

  1. Simpson, R. J., Florida-James, G. D., Whyte, G. P., Black, J. R., Ross, J. A., Guy, K. Apoptosis does not contribute to the blood lymphocytopenia observed after intensive and downhill treadmill running in humans. Res. Sports Med. 15, 157-174 (2007).
  2. Steensberg, A., Morrow, J., Toft, A. D., Bruunsgaard, H., Pedersen, B. K. Prolonged exercise, lymphocyte apoptosis and F2-isoprostanes. Eur. J. Appl. Physiol. 87, 38-42 (2002).
  3. Mooren, F. C., Bloming, D., Lechtermann, A., Lerch, M. M., Völker, K. Lymphocyte apoptosis after exhaustive and moderate exercise. J. Appl. Physiol. 93, 147-153 (2002).
  4. Peters, E. M., Eden, M. V. a. n., Tyler, N., Ramautar, A., Chutergoon, A. A. Prolonged exercise does not cause lymphocyte DNA damage or increased apoptosis in well-trained endurance athletes. Eur. J. Appl. Physiol. 98, 124-131 (2006).
  5. Wang, J. -. S., Huang, Y. -. H. Effects of exercise intensity on lymphocyte apoptosis induced by oxidative stress in men. Eur. J. Appl. Physiol. 95, 290-291 (2005).
  6. Mooren, F. C., Lechtermann, A., Völker, K. Exercise-induced apoptosis of lymphocytes depends on training status. Med. Sci. Sports Exerc. 36, 1476-1483 (2004).
  7. Navalta, J. W., Sedlock, D. A., Park, K. -. S. Blood treatment influences the yield of apoptotic lymphocytes after maximal exercise. Med. Sci. Sports Exerc. 37, 369-373 (2005).

Play Video

Citar este artículo
Navalta, J., McFarlin, B., Simpson, R., Fedor, E., Kell, H., Lyons, S., Arnett, S., Schafer, M. Finger-stick Blood Sampling Methodology for the Determination of Exercise-induced Lymphocyte Apoptosis. J. Vis. Exp. (48), e2595, doi:10.3791/2595 (2011).

View Video