Organotypic hippocampal टुकड़ा संस्कृतियों
Summary
हम एक विधि का वर्णन है कि आसानी से अन्य मस्तिष्क क्षेत्रों के लिए अनुकूलित किया जा सकता organotypic hippocampal स्लाइस तैयार. मस्तिष्क स्लाइसें झरझरा झिल्ली और एक अंतरफलक के रूप में की अनुमति दी है संस्कृति मीडिया पर रखी हैं. इस विधि संस्कृति में 2 सप्ताह के लिए हिप्पोकैम्पस के सकल वास्तुकला को बरकरार रखता है.
Abstract
हिप्पोकैम्पस, limbic प्रणाली के एक घटक, दीर्घकालिक स्मृति और स्थानिक नेविगेशन 1 में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है. Hippocampal न्यूरॉन्स मजबूत सक्रियण के संक्षिप्त अवधि के बाद उनके कनेक्शन की ताकत को संशोधित कर सकते हैं. इस घटना, दीर्घकालिक potentiation (LTP) के रूप में जाना जाता घंटों या दिनों के लिए पिछले है और सबसे अच्छा सीखने और स्मृति 2 के लिए उम्मीदवार तंत्र बन सकता है. इसके अलावा, अच्छी तरह से परिभाषित और हिप्पोकैम्पस 3 का शरीर रचना विज्ञान कनेक्टिविटी यह एक शास्त्रीय मॉडल synaptic पारेषण और synaptic plasticity 4 अध्ययन प्रणाली बना दिया है.
Hippocampal synapses के फिजियोलॉजी के बारे में हमारी समझ के रूप में वृद्धि हुई है और आणविक खिलाड़ियों की पहचान बन गया, synaptic प्रोटीन में हेरफेर करने की जरूरत अनिवार्य हो गया. Organotypic hippocampal संस्कृतियों आसान जीन हेरफेर और सटीक औषधीय हस्तक्षेप के लिए संभावना की पेशकश लेकिन synaptic संगठन है कि दिनचर्या संस्कृति dissociated न्यूरॉन्स तरीकों की तुलना में एक अधिक प्राकृतिक संदर्भ में synapse समारोह को समझने के लिए महत्वपूर्ण है बनाए रखने.
यहाँ हम एक विधि को तैयार करने और संस्कृति hippocampal स्लाइस कि आसानी से अन्य मस्तिष्क क्षेत्रों के लिए अनुकूलित किया जा सकता उपस्थित थे. इस विधि आनुवंशिक हेरफेर के लिए स्लाइस वायरल संक्रमण 5,6 या biolistics 7 की तरह अलग अलग दृष्टिकोण का उपयोग करने के लिए आसान पहुँच अनुमति देता है. इसके अलावा, स्लाइस जैव रासायनिक 8 assays के लिए आसानी से बरामद किया जा सकता है, या इमेजिंग 9 या electrophysiological 10 प्रयोगों के लिए सूक्ष्मदर्शी को हस्तांतरित.
Protocol
Discussion
इस विधि पहले Stoppini एट अल द्वारा वर्णित विधि पर आधारित है 11. और संस्कृति hippocampal स्लाइस के लिए एक तेजी से तरीके प्रदान करता है. इस प्रोटोकॉल का सबसे महत्वपूर्ण पहलू स्लाइस बाँझ बनाए रखना है, इसलिए यह ?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम NINDS द्वारा वित्त पोषित – एनआईएच R01NS060756
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cell culture inserts | Millipore | PICM03050 | ||
| 6 well plates | BD Falcon | 353046 | ||
| Tissue Slicer | Stoelting | 51425/51415 | ||
| Microscope | Olympus | SZX7-ILLD2-100 | ||
| Hippocampus dissecting tool | F.S.T | 10099-15 | ||
| Large utility scissors. Perfection | F.S.T | 37500-00/37000-00 Right/ Left handed | ||
| Iris Spatula | F.S.T | 10093-13 | ||
| Straight spatula | F.S.T | 10094-13 | ||
| Rounded spoon micro spatula | VWR | 57949-039 | ||
| Dissecting single cutting edge needle | Electron Microscopy Science | 72946 | ||
| Dissecting tweezers | Dummont | #2 | ||
| Small dissecting scissors | F.S.T | 14060-10 | ||
| MEM Eagle medium | Cellgro | 50-019 PB | ||
| Horse serum heat inactivated | Invitrogen | 26050-88 | ||
| L-Glutamine (200 mM) | Invitrogen | 25030081 | ||
| CaCl2 (1 M) | Sigma | C3881 | ||
| MgSO4 (1 M) | Sigma | M2773 | ||
| Insulin (1 mg/ml), dissolved in HCl 0.01 N | Sigma | I0516 | ||
| Ascorbic Acid, solution (25%) | Sigma | A4544 | ||
| D-Glucose | Sigma | G5767 | ||
| NaHCO3 | Sigma | S6014 | ||
| Hepes | Sigma | H7523 | ||
| Sucrose | Sigma | S5016 | ||
| Phenol Red Solution 0.5% in DPBS | Sigma | P0290 | ||
| KCl | Sigma | P3911 | ||
| MgCl2 (1 M) | Sigma | M9272 |
Referencias
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