Injeção intracraniana da adeno-associado vetores virais

Injeção intracraniana de vetores virais projetadas para expressar uma proteína fluorescente é uma técnica de rotulagem versátil para visualização de subgrupos específicos de células em diferentes regiões do cérebro in vivo e em secções do cérebro. Ao contrário da injeção de corantes fluorescentes, rotulagem viral oferece segmentação de tipos de células individuais e é menos caro e demorado do que estabelecer linhas de ratinhos transgénicos. Nesta técnica, um vetor adeno-associado (AAV) viral é injetado intracraniana usando coordenadas estereotáxica, uma micropipeta e uma bomba automatizada para entrega preciso de AAV para a área desejada com o mínimo dano ao tecido circundante. Parâmetros de injeção pode ser adaptado para experimentos individuais, ajustando a idade do animal em injeção, injeção de localização, volume de injeção, a taxa de injeção, sorotipo AAV eo promotor dirigindo a expressão do gene. Dependendo das condições de escolhido, virally induzida a expressão do transgene pode permitir a visualização de grupos de células, as células individuais ou multa processos celulares, até o nível das espinhas dendríticas. O experimento mostrado aqui representa uma injeção de double-stranded AAV expressando a proteína fluorescente verde para a rotulagem de neurônios e células gliais no córtex visual primário do mouse.