Adeno - 관련 바이러스성 벡터의 Intracranial 분사
Summary
여기서 우리는 시각 피질의 뉴런과 glia의 형광 라벨에 대한 AAV 벡터의 intracranial 주사를 제시한다.
Abstract
형광 단백질을 표현할 수 있도록 설계 바이러스 벡터의 Intracranial 주사는 생체내 및 뇌 부분에서 모두 서로 다른 뇌 영역의 세포의 특정 하위 집합의 시각화를위한 다양한 분류 방법입니다. 형광 염료의 주입과는 달리, 바이러스 라벨 개별 세포 유형의 대상으로 제공하며, 유전자 변형 마우스 라인을 설정하는 것보다 소비 저렴하고 시간입니다. 이 기법에서는, adeno – 관련 바이러스 (AAV) 벡터는 intracranially 주변 조직에 피해를 최소화하여 원하는 지역 stereotaxic 좌표, micropipette와 AAV의 정확한 배달을 위해 자동 펌프를 사용하여 주입합니다. 사출 매개 변수가 주입의 주입, 주입 위치, 분사의 볼륨, 속도, AAV 혈청형 및 유전자 발현을 구동 모터에있는 동물 연령을 조정하여 각각의 실험에 맞출 수 있습니다. 선택한 조건에 따라 virally 유발 transgene 표현은 아래로 돌기 쪽이 수준으로 세포, 개별 셀 또는 미세 세포 프로세스 그룹의 시각화를 허용할 수 있습니다. 여기에 표시된 실험은 마우스 기본 시각 피질의 뉴런과 glia의 라벨에 대한 녹색 형광 단백질을 표현하는 이중 좌초 AAV의 주사를 묘사.
Protocol
Discussion
Virally – 중재 유전자 전달은 신경 프로세스와 뇌 장애 1,2,3 치료 연구를위한 잠재력을 보유하고 있습니다. 이 기법의 가장 큰 융통성도 찬란 체외 및 생체내 4 두 이미징을위한 세포를 라벨에 악용될 수 있습니다. 여기 우리는 뉴런과 향상된 녹색 형광 단백질을 표현하는 이중 좌초 adeno – 협회 바이러스를 사용하여 마우스를 시각 피질에 glia의 도입에 대한 자세한 절차를 설?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 NIH (EY012977), 버로우즈 웰컴 기금, 화이트홀 재단과 슬로언 재단 (AKM)에서 의생명 과학의 경력 수상의 부여에 의해 가능하게되었다.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stoelting Mouse and Neonatal Rat Adaptor | Stoelting | 51625 | Regular stereotax for securing animals for surgery may be substituted | |
| Extra Fine Bonn Scissors, 8.5cm, straight tip, cutting edge 13mm | Fine Science Tools | 14084-08 | ||
| Eye Dressing Forceps, 10cm, tip width 0.5mm, curved | Fine Science Tools | 11152-10 | ||
| Dumont #5/45 Forceps- Dumoxel Standard Tip, 11cm, angled | Fine Science Tools | 11251-35 | Extra-fine tipped forceps for performing craniotomy | |
| Standard Pattern Forceps, straight, 2.5mmx1.35mmtip, 12cm | Fine Science Tools | 11000-12 | ||
| Microtorque Control Box and Tech2000 handpiece | Ram Products, Inc. | TECH2000ON/OFF | Dental drill | |
| Micro Drill Stainless Steel Burrs 1.4mm tip diameter | Fine Science Tools | 19008-14 | ||
| Wiretrol micropipettes, to deliver 1-5 Ul | VWR International/ Drummond | 5-000-1001 or 53480-287 | ||
| Mineral oil | VWR International | 29447-338 | ||
| Manual Micromanipulator and Tilting Base (right-handed) | World Precision Instruments, Inc. | M3301-M3-R | Used for determining stereotaxic co-ordinates | |
| UltraMicroPump (UMP3) (one) with SYS-Micro4 Controller | World Precision Instruments, Inc. | UMP3-1 | ||
| Sutures | VWR International | 95056-952 | ||
| P-97 Flaming/Brown Micropipette Puller | Sutter Instruments | P-97 | ||
| Tobradex | Available from your institution’s veterinary services |
Referencias
- Kaplitt, M. G., Leone, P., Samulski, R. J., Xiao, X., Pfaff, D. W., O’Malley, K. L., During, M. J. Long-term gene expression and phenotypic correction using adeno-associated virus vectors in the mammalian brain. Nat Genet. 8, 148-154 (1994).
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- Lo, W. D., Qu, G., Sferra, T. J., Clark, R., Chen, R., Johnson, P. R. Adeno-associated virus-mediated gene transfer to the brain: duration and modulation of expression. Hum Gene Ther. 10, 201-213 (1999).
- Lowery, R. L., Zhang, Y., Kelly, E. A., Lamantia, C. E., Harvey, B. K., Majewska, A. K. Rapid long-term labeling of cells in the developing and adult rodent visual cortex using double-stranded adeno-associated viral vectors. Dev Neurobiol. 69, 674-688 (2009).
