暗順応スライス標本におけるマウス網膜神経細胞からパッチクランプ記録
Summary
ここでは、電気生理学的記録のためのマウスの網膜の暗順応のスライスを生成するための手順を説明します。
Abstract
私たちの視覚経験は、私たちの網膜光受容体の視物質が光エネルギーの光子を吸収し、細胞膜中の環状ヌクレオチド依存性チャネルの閉鎖につながる細胞内イベントのカスケードを開始するときに開始されます。膜電位で生じる変化は、桿体と錐体シナプス端末の両方からの神経伝達物質の放出量の削減に順番につながる。光受容体の膜電位の光誘発変化が網膜の下流の活動につながるかを測定するために、科学者は数十年の1,2のための網膜スライス標本からの電気生理学的記録を行っている。過去にこれらのスライスは、ろ紙に接続されて網膜組織にカミソリの刃を使って手動でカットされている。近年でスライスの別の方法は、網膜組織が低ゲル化温度の寒天に埋め込まれているそれによって開発され、クールな解決策にスライスミクロトーム3,4を振動させる。この準備は少なく、表面の損傷と非常に堅牢な光誘発反応と網膜のスライスを生成します。ここでは、この手順を視覚的に色素を漂白避けるために、赤外光の下で実行する方法を文書化します。
Protocol
1。準備電極 1M NaClに両方それらを浸漬し、それらの間に15Vの駆動〜20秒に1 Hzの正弦波を用いて、記録と参照電極を準備するマイクロピペットプラー（サターインスツルメンツP – 97）を使用して、記録電極を行います。パッチピペットは、1.2mmの外径と0.69ミリメートル（サッタインスツルメンツ、カタログ番号B120 – 69 – 10）の内径とホウケイ酸ガラスを使用してください。電極の…
Discussion
脊椎動物の網膜からのスライスの記録は、何十年も1,2のために作られており、網膜回路が入射光をエンコードする方法のより深い理解を提供することにかなり成功している。かみそりの刃に直接振動ミクロトームで切断するのではなくの利点は、網膜のスライスが表面に少ないダメージを被ることがあります。吸引ピペットで、このダメージとターゲットだけ細胞のタイプのほとん?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、NIHのグラントEY17606（APS）によってサポートされていました。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Micropipette Puller | Sutter Instruments | P-97 | ||
| Borosilicate glass | Sutter Instruments | B120-69-10 | ||
| Polyethylene tubing | Intramedic | PE205 | ||
| Agar | Sigma | A7002 | ||
| Low gelling temp agarose | Sigma | A0701 | ||
| Ames’ Medium | Sigma | A1420 | ||
| Penicillin-Streptomycin | Sigma | P0781 |
Referencias
- Weblin, F. Transmission along and between rods in the tiger salamander retina. J Physiol. 280, 449-470 (1978).
- Wu, S. M. Synaptic connections among retina neurons in living slices. J Neurosci Methods. 20, 139-149 (1987).
- Rieke, F. Temporal contrast adaptation in salamander bipolar cell. J Neurosci. 21, 9445-9454 (2001).
- Armstrong-Gold, C., &, R. i. e. k. e., F, . Bandpass filtering at the rod to second-order cell synapse in salamander (Ambystoma tigrinum) retina. J Neurosci. 23, 3796-3806 (2003).
- Masland, R. H. The fundamental plan of the retina. Nat Neurosci. 4, 877-886 (2001).
- Wassle, H. Parallel processing in the mammalian retina. Nat Rev Neurosci. 5, 747-757 (2004).
Tags
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Citar este artículo
Arman, A. C., Sampath, A. P. Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation. J. Vis. Exp. (43), e2107, doi:10.3791/2107 (2010).