어두운 적응 슬라이스 준비에 마우스 망막 뉴런에서 패치 클램프 레코딩
Summary
여기 electrophysiological 레코딩을위한 마우스 망막의 어두운 적응 조각을 생성하는 절차를 설명합니다.
Abstract
우리의 시각적 경험은 우리의 망막 photoreceptors의 시각 색소가 빛 에너지의 광자를 흡수하여 세포막의 순환 – 염기 – 문이 채널의 폐쇄로 이어질 세포 사건의 폭포를 시작하면 시작됩니다. 멤브레인 전위의 결과로 변경 막대와 원뿔 시냅스 터미널 모두에서 신경 전달 물질 방출의 양을 감소에 차례로 연결됩니다. photoreceptor 막 잠재력에 가벼운 evoked 변화가 망막에 하류 활동으로 연결 방법을 측정하기 위해 과학자들은 수십 년 1,2에 대한 망막 슬라이스 준비에서 electrophysiological 음반을 만들었습니다. 과거에는 이러한 조각은 거름종이에 첨부되어 망막 조직에 면도날로 수동으로 절단되었습니다;과 함께 최근 몇 년 동안 깔끔히의 또 다른 방법은 망막 조직이 낮은 겔화 온도 한천 배지에 포함된 의하여 개발되었으며 냉각 솔루션에 슬라이스 마이크로톰 3,4 진동. 이 준비가 덜 표면 손상이 매우 강력한 빛을 evoked 반응과 함께 망막 조각을 생산하고 있습니다. 여기 우리는이 절차는 시각 색소를 표백되지 않도록 적외선에 따라 할 수있는 방법을 문서.
Protocol
Discussion
척추 망막에서 슬라이스 녹음 수십 년 1,2에 대해되었습니다, 그리고 망막 회로는 입사 광을 인코딩하는 방법에 깊은 이해를 제공하는 매우 성공적으로되었습니다. 진동 마이크로톰와 절삭 오히려 직접보다 면도날로의 장점은 망막 조각이 표면에 덜 손상을 초래한다는 것입니다. 흡입 피펫으로 그것은 단지 세포 유형의 대부분 5,6을 확인했습니다 망막 회로, 그들의 연결을 유지 ?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 NIH 그랜트 EY17606 (APS)에 의해 지원되었다.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Micropipette Puller | Sutter Instruments | P-97 | ||
| Borosilicate glass | Sutter Instruments | B120-69-10 | ||
| Polyethylene tubing | Intramedic | PE205 | ||
| Agar | Sigma | A7002 | ||
| Low gelling temp agarose | Sigma | A0701 | ||
| Ames’ Medium | Sigma | A1420 | ||
| Penicillin-Streptomycin | Sigma | P0781 |
Referencias
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