마우스 요로 감염의 Transurethral 유도
Summary
이 동영상은 transurethrally 마우스 요로 감염을 유발하고 결과 감염의 범위를 정할 방법을 보여 것입니다.
Abstract
관심 Uropathogenic 세균성 변종은 한천을 재배하고 있습니다. 일반적으로, uropathogenic<em> E. 대장균</em> (UPEC) 및 기타 종자는 37 Luria – Bertani (LB) 한천에서 밤새 성장 수 있습니다 ° C 주위 공기. UPEC의 계통 LB 한천에 노란 흰색 반투명 식민지로 성장합니다. 적절한 콜로니 형태의 확인에 따라, 하나의 식민지는 다음 국물에 교양으로 포착하고 있습니다. LB의 국물은 대부분 uropathogenic 세균의 변종에 사용할 수 있습니다. 두 시리얼, 하룻밤 LB의 국물 문화는 유형 I 필리, uropathogenic 박테리아에 대해 잘 정의된 독성 요소의 표현을 향상시키기 위해 고용 수 있습니다. 국물 문화가 호수 (PBS)를 버퍼 인산에서 원하는 농도로 희석하고 있습니다. 에이트에 12주 오래된 여성 생쥐는 isoflurane 마취하에 위치하고 transurethrally 30 게이지 주사기를 튜브가 덮인 폴리에틸렌을 사용하여 박테리아와 주사를하고 있습니다. 경험적으로 각각의 박테리아 / 마우스 변형 조합에 대한 결정되어야합니다 일반 inocula은 10아르<sup> 6</sup> 10<sup> 8</supPBS의 10-50 microliters에서> cfu마다 마우스. 원하는 감염 기간이 지나면 (한 몇 주 일), 소변 샘플과 방광과 신장이 모두 수확하고 있습니다. 각 기관은, 다진 PBS에 배치하고, 블루 불렛 균 질기에 균질입니다. 소변과 조직 homogenates는 순차적으로 PBS에 희석하고 적절한 한천에 대한 양식입니다. 그 다음날은 콜로니 형성 단위가 계산됩니다.
Protocol
Discussion
박테리아의 transurethral 접종하여 마우스 요도의 요로 감염의 유도는 오랜 설립하지만, 기술적으로 까다로운 절차 11. 기형 및 Hultgren 최근 마우스 요로 감염 13 transurethral 기술의 우수 리뷰를 발표했다. 본 논문에서는, 우리는 더 이상이 실험 방법의 미세한 포인트를 설명하려고합니다.
초보자는 방광을 폭로 정중선 개복술을 수행하는 인도 잉크 (PBS 1 %)의 희석 …
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 자신의 전문 기술 지원을 셸리 샤오와 제니퍼 펜을 인정하고 싶습니다. 이 작품은 소아 비뇨기과와 스탠포드 소아 연구 기금의 학회에서 부여를 통해 가능하게되었다.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cryovial tubes, 2.0 ml polypropylene (no caps) | E&K Scientific | 640201 | ||
| Caps for cryovial tubes, with ‘O’ ring | E&K Scientific | 440011-N | ||
| Bullet Blender | Next Advance | BBX24 | ||
| Zirconium Oxide Beads (0.5mm) | Next Advance | ZROB05 | ||
| Stainless Steel Beads (1.6mm) | Next Advance | SSB16 | ||
| Stainless Steel Bead Blend (0.9-2.0mm) | Next Advance | SSB14B | ||
| CBA/J Mice, 8-12 week old female | Jackson Laboratories | 000656 | ||
| Phosphate Buffered Saline (NaCl 137mM, KCl 2.7mM, Na2HPO4 4.3mM, KH2PO4 1.4mM) | EMD | EM-SX0420-13 (NaCl) EM-PX1405-1 (KCl) EM1.06585.0 (Na2HPO4) EM-5108-1 (KH2PO4) | ||
| LB agar | ||||
| LB broth | EMD | 1.10285.0500 | ||
| Isoflurane (Aerrane) | Baxter | NDC 10019-773-60 | ||
| Inoculating loops | Fisher Scientific | 22-363-601 | ||
| Eosin-methylene blue (EMB) agar powder | Himedia Laboratories | MM022-500G | ||
| MacConkey agar powder | Difco | 212123 | ||
| LB agar powder | Difco | 244520 | ||
| Intramedic non-radiopaque polyethylene tubing, PE10 [inner dimension 0.28 mm (0.011 inch); outer dimension 0.61 mm (0.024 inch)] | BD Biosciences | 427401 | ||
| 30 gauge needles, 1/2 inch | BD Biosciences | 305106 | ||
| 1 ml tuberculin Slip-Tip syringe | BD Biosciences | 309602 | ||
| 3 ml Luer-Lock syringe | BD Biosciences | 309585 |
Referencias
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