عبر الاحليل تحريض العدوى ماوس المسالك البولية
Summary
وهذا الفيديو شرح طرق للحث على transurethrally التهابات المسالك البولية والماوس تحديد مدى الإصابات الناجمة عن ذلك.
Abstract
تزرع سلالات بكتيرية Uropathogenic الفائدة على أجار. عموما ، uropathogenic<em> E. القولونية</emيمكن زراعتها> (UPEC) وغيرها من سلالات بين عشية وضحاها على لوريا ، Bertani (LB) أغار عند 37 درجة مئوية في الهواء المحيط. سلالات UPEC تنمو المستعمرات الأصفر والأبيض الشفاف على أجار LB. بعد تأكيد مورفولوجيا مستعمرة المناسبة ، ثم يتم اختيار واحد لتكون مستعمرات المستزرعة في المرق. ويمكن استخدام مرق LB لمعظم السلالات البكتيرية uropathogenic. ويمكن استخدام اثنين من المسلسل ، وبين عشية وضحاها مرق LB الثقافات لتعزيز التعبير عن النوع الأول من الشعرة ، وهذا عامل الفوعة واضحة المعالم للبكتيريا uropathogenic. مخففة الثقافات مرق للتركيز المطلوب في الفوسفات مخزنة المالحة (PBS). وضعت ثمانية إلى 12 أسبوع من العمر إناث الفئران تحت التخدير isoflurane وطعمت transurethrally مع البكتيريا باستخدام أنابيب البولي ايثيلين المغطاة قياس 30 المحاقن. قائح النموذجية ، التي يجب أن يتحدد تجريبيا لكل تركيبة سلالة بكتيرية / الماوس ، هي 10<sup> 6</sup> إلى 10<sup> 8</sup> CFU في الماوس في 10-50 microliters من برنامج تلفزيوني. بعد فترة العدوى المطلوب ويتم حصاد (يوم واحد لعدة أسابيع) ، وعينات البول والمثانة والكلى على حد سواء. غير مفروم كل جهاز ، وضعت في برنامج تلفزيوني ، والمتجانس في الخالط رصاصة الأزرق. مخففة متسلسل البول والانسجة الخليط في برنامج تلفزيوني ومثقف على أجار المناسبة. في اليوم التالي ، يتم حساب وحدات تشكيل مستعمرة.
Protocol
Discussion
تحريض البولية عدوى المسالك الماوس بواسطة التلقيح عبر الاحليل من البكتيريا هو إجراء المنشأة منذ فترة طويلة لكنه طالب تقنيا 11. وعلقت Hultgren نشرت مؤخرا استعراضا ممتازة من التقنيات عبر الاحليل العدوى الماوس المسالك البولية 13. في هذه الورقة ، ونحن نحاول توضيح م…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
فإن الكتاب أن نعترف Shelly شيه وباين جنيفر لمساعدتها التقنية للخبراء. وقدم هذا العمل ممكنا من خلال منح مقدمة من جمعية جراحة المسالك البولية للأطفال وأبحاث طب الأطفال الصندوق ستانفورد.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cryovial tubes, 2.0 ml polypropylene (no caps) | E&K Scientific | 640201 | ||
| Caps for cryovial tubes, with ‘O’ ring | E&K Scientific | 440011-N | ||
| Bullet Blender | Next Advance | BBX24 | ||
| Zirconium Oxide Beads (0.5mm) | Next Advance | ZROB05 | ||
| Stainless Steel Beads (1.6mm) | Next Advance | SSB16 | ||
| Stainless Steel Bead Blend (0.9-2.0mm) | Next Advance | SSB14B | ||
| CBA/J Mice, 8-12 week old female | Jackson Laboratories | 000656 | ||
| Phosphate Buffered Saline (NaCl 137mM, KCl 2.7mM, Na2HPO4 4.3mM, KH2PO4 1.4mM) | EMD | EM-SX0420-13 (NaCl) EM-PX1405-1 (KCl) EM1.06585.0 (Na2HPO4) EM-5108-1 (KH2PO4) | ||
| LB agar | ||||
| LB broth | EMD | 1.10285.0500 | ||
| Isoflurane (Aerrane) | Baxter | NDC 10019-773-60 | ||
| Inoculating loops | Fisher Scientific | 22-363-601 | ||
| Eosin-methylene blue (EMB) agar powder | Himedia Laboratories | MM022-500G | ||
| MacConkey agar powder | Difco | 212123 | ||
| LB agar powder | Difco | 244520 | ||
| Intramedic non-radiopaque polyethylene tubing, PE10 [inner dimension 0.28 mm (0.011 inch); outer dimension 0.61 mm (0.024 inch)] | BD Biosciences | 427401 | ||
| 30 gauge needles, 1/2 inch | BD Biosciences | 305106 | ||
| 1 ml tuberculin Slip-Tip syringe | BD Biosciences | 309602 | ||
| 3 ml Luer-Lock syringe | BD Biosciences | 309585 |
Referencias
- Schaeffer, A. J., Schwan, W. R., Hultgren, S. J., Duncan, J. L. Relationship of type 1 pilus expression in Escherichia coli to ascending urinary tract infections in mice. Infect Immun. 55, 373-380 (1987).
- Rouschop, K. M. Urothelial CD44 facilitates Escherichia coli infection of the murine urinary tract. J Immunol. 177, 7225-7232 (2006).
- Malaviya, R., Ikeda, T., Abraham, S. N. Contribution of mast cells to bacterial clearance and their proliferation during experimental cystitis induced by type 1 fimbriated E. coli. Immunol LettM. 91, 103-111 (2004).
- Lane, M. C., Alteri, C. J., Smith, S. N., Mobley, H. L. Expression of flagella is coincident with uropathogenic Escherichia coli ascension to the upper urinary tract. Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 16669-16674 (2007).
- Hvidberg, H. Development of a long-term ascending urinary tract infection mouse model for antibiotic treatment studies. Antimicrob Agents Chemother. 44, 156-163 (2000).
- Hopkins, W. J., Hall, J. A., Conway, B. P., Uehling, D. T. Induction of urinary tract infection by intraurethral inoculation with Escherichia coli: refining the murine model. J Infect Dis. 171, 462-465 (1995).
- Hopkins, W. J., Gendron-Fitzpatrick, A., Balish, E., Uehling, D. T. Time course and host responses to Escherichia coli urinary tract infection in genetically distinct mouse strains. Infect Immun. 66, 2798-2802 (1998).
- Gunther, N. W. t., Lockatell, V., Johnson, D. E., Mobley, H. L. In vivo dynamics of type 1 fimbria regulation in uropathogenic Escherichia coli during experimental urinary tract infection. Infect Immun. 69, 2838-2846 (2001).
- Bishop, B. L. Cyclic AMP-regulated exocytosis of Escherichia coli from infected bladder epithelial cells. Nat Med. 13, 625-630 (2007).
- Thumbikat, P., Waltenbaugh, C., Schaeffer, A. J., Klumpp, D. J. Antigen-specific responses accelerate bacterial clearance in the bladder. J Immunol. 176, 3080-3086 (2006).
- Hagberg, L. Ascending, unobstructed urinary tract infection in mice caused by pyelonephritogenic Escherichia coli of human origin. Infect Immun. 40, 273-283 (1983).
- Hopkins, W. J., Hall, J. A., Conway, B. P., Uehling, D. T. Induction of urinary tract infection by intraurethral inoculation with Escherichia coli: refining the murine model. J Infect Dis. 171, 462-465 (1995).
- Hung, C. S., Dodson, K. W., Hultgren, S. J. A murine model of urinary tract infection. Nat Protoc. 4, 1230-1243 (2009).
