白血球ホーミングと移行の非侵襲的イメージング in vivoで</em
Summary
ここで、我々は、マウスの足蹠にホーミング白血球を研究する非侵襲的二光子（2P）顕微鏡のアプローチを説明します。私たちは、組織イメージングの準備の技術的側面を議論し、実行してデータ収集するための初期設定から典型的な実験を通してリーダーを歩く。
Abstract
二光子（2P）顕微鏡は、広く生物学者によって適応された高分解能のイメージング技術です。 2P顕微鏡の値は、それがそのまま組織内および生きたマウスの細胞の挙動に関する豊富な時空間情報を提供することです。白血球の動員が感染し、このチェックボックスをオフにした場合に対する宿主防御において重要な役割を果たし、炎症や自己免疫疾患に貢献することができます。細胞は光散乱の組織内に深くある血管内に急速に移動しているので、 生体内で白血球動員を研究することは技術的に困難である。これまでに、ほとんどの生体内イメージング研究では、血管や組織を露出させる手術の準備が必要です。手術自体によって誘導される組織の損傷や炎症を避けるために、ここで、我々は、マウスの足蹠とphalanxの複数形で白血球人身売買を研究するために使用できる非侵襲的単一細胞イメージングのアプローチを説明します。私たちは、2Pのイメージングの準備の技術的側面を議論し、実行してデータ収集するための初期設定から典型的な実験を通してリーダーを歩く。
Protocol
Discussion
このビデオプロトコルでは、炎症に反応して白血球の動員の非侵襲的な2Pイメージングのための手順を示しています。
足蹠はアレルギー、感染症や自己免疫疾患の4から7のような炎症を研究するための古典的な生理学的なサイトです。 2Pイメージングは、血管のローリングと接着のエフェクター機能のサイトへの走化性に、白血球人身売買経路の明確な手順?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、NIHの助成R01 – 3155から53502とワシントン大学、ファイザー医学の研究契約によってサポートされていました。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane, USP | Butler Animal Health Supply | 029405 | ||
| 655nm non-targeted quantum dots | Invitrogen | Q21021MP | ||
| Tetramathylrhodamine conjugated E. coli BioParticles |
Invitrogen | E2862 | ||
| Listeria monocytogenes (Lm) | Reference 2 | |||
| Quick gel | Duro | |||
| Puralube Vet Ointment | Pharmaderm Animal Health | |||
| Insulin syringes | BD | 08290-3284-38 | ||
| PBS | Thermo Scirntific | SH30256.02 |
Referencias
- Faust, N., Varas, F., Kelly, L. M., Heck, S., Graf, T. Insertion of enhanced green fluorescent protein into the lysozyme gene creates mice with green fluorescent granulocytes and macrophages. Blood. 96, 719-726 (2000).
- Zinselmeyer, B. H., Lynch, J. N., Zhang, X., Aoshi, T., Miller, M. J. Video-rate two-photon imaging of mouse footpad – a promising model for studying leukocyte recruitment dynamics during inflammation. Inflamm Res. 57, 93-96 (2008).
- Zinselmeyer, B. H., Dempster, J., Wokosin, D. L., Cannon, J. J., Pless, R., Parker, I., Miller, M. J. Chapter 16. Two-photon microscopy and multidimensional analysis of cell dynamics. Methods Enzymol. 461, 349-378 (2009).
- Gray, D. F., Jennings, P. A. Allergy in experimental mouse tuberculosis. Am Rev Tuberc. 72, 171-195 (1955).
- Lin, A., Loughman, J. A., Zinselmeyer, B. H., Miller, M. J., Caparon, M. G. Streptolysin S inhibits neutrophil recruitment during the early stages of Streptococcus pyogenes infection. Infect Immun. 77, 5190-5201 (2009).
- Smith, C. J., Zhang, Y., Koboldt, C. M., Muhammad, J., Zweifel, B. S., Shaffer, A., Talley, J. J., Masferrer, J. L., Seibert, K., Isakson, P. C. Pharmacological analysis of cyclooxygenase-1 in inflammation. Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 13313-13318 (1998).
- Wipke, B. T., Allen, P. M. Essential role of neutrophils in the initiation and progression of a murine model of rheumatoid arthritis. J Immunol. 167, 1601-1608 (2001).
- Baez, S. An open cremaster muscle preparation for the study of blood vessels by in vivo microscopy. Microvasc Res. 5, 384-394 (1973).
- Mempel, T. R., Scimone, M. L., Mora, J. R., von Andrian, U. H. in vivo imaging of leukocyte trafficking in blood vessels and tissues. Curr Opin Immunol. 16, 406-417 (2004).
- Miller, M. J., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. Autonomous T cell trafficking examined in vivo with intravital two-photon microscopy. Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 2604-2609 (2003).
