Katmanlı Ağar Montajı: Ters Mikroskopla Canlı Zebra Balığı Embriyolarını Uzun Süreli Görüntülemeye Hazırlama
Published: April 30, 2023
Abstract
Kaynak: Upadhyay S., et.al. Tüm Zebra Balığı Embriyolarının Uzun Süreli Konfokal Mikroskopisi için Katmanlı Montaj Yöntemi. J. Vis. Exp. (2020).
Bu makalede, uzun süreli görüntüleme için canlı zebra balığı embriyolarını monte etmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntem, Inverted Microscope’ta görüntüleme için normal cam tabanlı mikroskopi tabakları kullanılarak uygun maliyetli ve kolay gerçekleştirilir. Montaj, farklı konsantrasyonlarda agarose katmanlarında gerçekleştirilir.
Protocol
1. Embriyoların hazırlanması Çiftleşmeden sonra, E3’teki embriyoları bir Petri kabında hasat edin ve monte etmeden önce yaklaşık 28 saat boyunca 26,5 °C’de kuluçkaya yatırın.NOT: Bu, embriyoların gelişimini yavaşlatır, böylece embriyolar görüntülemenin başlangıcında yaklaşık 30 somit aşamasındadır. E3’te embriyoları %0.016-0.020 Trikainde uyuşturmak. Pigmentasyonu inhibe etmek için PTU’yu 200 μM konsantrasyona ekleyin. …
Representative Results
Şekil 1 : Montaj yönteminin açıklaması. (A) Zebra balığı embriyosunu 35 mm’lik tabaktaki cam tabanın oluşturduğu küçük kuyuya ekleyin. (B) Embriyoyu örtmek için küçük kuyuya agarose tabakası 1 ekleyin. (C) Küçük kuyunun üzerine dikkatlice bir kapak camı yerleştirin. (D) 35 mm’lik kabın tüm altına agarose tabakası 2 ekleyin. (E) Yemeğe E3 ekleyin. (F) Montaj kurulumunun bir kesitinin şematik…
Materials
| Low melting agarose | Sigma-Aldrich, MO | A9414 | Store dissolved solution at 4 °C |
| 35 mm glass bottom dishes with No. 0 coverslip and 10 mm diameter of glass bottom | MatTek Corporation, MA | P35GCOL-0-10-C | |
| Tricaine (MS-222) | Sigma-Aldrich, MO | E10521 | Store dissolved solution at 4 °C |
| N-phenylthiourea (PTU) | Sigma-Aldrich, MO | P7629 | Store dissolved solution at -20 °C |
| DMC4500 digital microscope camera | Leica | NA | |
| Micro cover glass 22×22 mm | VWR | 48366 067 |
Citar este artículo
Layered Agar Mounting: Preparing Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging with an Inverted Microscope. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20186, doi: (2023).