層状寒天取り付け:逆顕微鏡による長期イメージングのための生きたゼブラフィッシュ胚の準備
Published: April 30, 2023
Abstract
出典:アップディヤイS.、et.al.ゼブラフィッシュ胚全体の拡張タイムラプス共焦点顕微鏡のための層状実装方法.J. ヴィス・エクス(2020).
この記事では、長期イメージングのために生きているゼブラフィッシュ胚を取り付ける方法について説明します。この方法は、逆顕微鏡でのイメージング用の通常のガラス底顕微鏡を使用して、費用対効果が高く、容易に実行できます。この取り付けは、異なる濃度のアガロースの層で行われる。
Protocol
1. 胚の調製 交配後、ペトリ皿でE3で胚を収穫し、取り付ける前に約28時間26.5°Cでインキュベートします。注: これは、胚の発達を遅くし、胚がイメージングの開始時に約30の中マイト段階にあるようにする。 E3で0.016-0.020%トリカインで胚を麻酔する。色素沈着を抑制するには、PTUを200μMの濃度に加えます。 解剖顕微鏡下で鉗子を使って胚をデ…
Representative Results
図1 : 取り付け方法の説明 (A)ゼブラフィッシュ胚を、35mm皿のガラス底で作られた小さな井戸に加えます。(B)胚を覆う小さな井戸にアガロース層1を加える。(C)慎重に小さな井戸の上にカバーガラスを置きます。(D) 35mm皿の底全体にアガロース層2を加えます。(E) 料理にE3を加えます。(F)取付け設定の断面の模式図。(G)最?…
Materials
| Low melting agarose | Sigma-Aldrich, MO | A9414 | Store dissolved solution at 4 °C |
| 35 mm glass bottom dishes with No. 0 coverslip and 10 mm diameter of glass bottom | MatTek Corporation, MA | P35GCOL-0-10-C | |
| Tricaine (MS-222) | Sigma-Aldrich, MO | E10521 | Store dissolved solution at 4 °C |
| N-phenylthiourea (PTU) | Sigma-Aldrich, MO | P7629 | Store dissolved solution at -20 °C |
| DMC4500 digital microscope camera | Leica | NA | |
| Micro cover glass 22×22 mm | VWR | 48366 067 |
Citar este artículo
Layered Agar Mounting: Preparing Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging with an Inverted Microscope. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20186, doi: (2023).