Light Sheet Microscopie Monstervoorbereiding: Montage van levende zebravisembryo's voor langdurige beeldvorming
Published: April 30, 2023
Abstract
Bron: Icha J., et al. Using Light Sheet Fluorescence Microscopy to Image Zebrafish Eye Development. J. Vis. Exp. (2016).
Dit artikel beschrijft de monstervoorbereiding voor lichtbladfluorescentiemicroscopie. Het demonstreert ook een methode om levende zebravisembryo’s te monteren voor langetermijnbeeldvorming, waardoor lange time-lapse-films van levende embryo’s in bijna fysiologische omstandigheden kunnen worden opgenomen.
Protocol
1. Monstervoorbereiding Het bereiden van de Agarose Mix Smelt 15 min voor het maken van het agarosemengsel één 1 ml aliquot van 1% laag smeltpunt agarose (opgelost in E3 medium) in een verwarmingsblok ingesteld op 70 °C. Zodra de agarose volledig gesmolten is, breng je 600 μl over in een verse tube van 1,5 ml, voeg je 250 μl E3 medium, 50 μl van 0,4% MS-222 en 25 μl vortexed kraalbouillonoplossing toe.OPMERKING: Dit maakt 925 μl van het mengsel, terwijl ext…
Materials
| Lightsheet Z.1 microscope | Carl Zeiss Microscopy | ||
| Low melting point agarose | Roth | 6351.1 | |
| Low melting point agarose | Sigma | A4018 or A9414 | |
| Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate (MESAB/ MS-222/Tricaine) | Sigma | E10521 | |
| 20 μl (1 mm inner diameter, marked black) capilllaries | Brand | 701904 | sold as spare part for transferpettor |
| Teflon tip plungers for 20 μl capillarie | Brand | 701932 | sold as spare part for transferpettor |
Citar este artículo
Light Sheet Microscopy Sample Preparation: Mounting Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20185, doi: (2023).