Preparación de muestras de microscopía de hoja de luz: Montaje de embriones de pez cebra vivo para imágenes a largo plazo

Published: April 30, 2023

Abstract

Fuente: Icha J., et al. Uso de la microscopía de fluorescencia de la hoja de luz para la imagen desarrollo de ojos de pez cebra. J. Vis. Exp. (2016).

Este artículo describe la preparación de muestras para la microscopía de fluorescencia de hoja de luz. También demuestra un método para montar embriones de pez cebra vivos para imágenes a largo plazo, lo que permite la grabación de películas de larga duración de embriones vivos en condiciones casi fisiológicas.

Protocol

1. Preparación de muestras Preparación de la mezcla de Agarose 15 minutos antes de hacer de la mezcla de agarose, derretir una alícuota de 1 ml de agarose de punto de fusión bajo (disuelto en medio E3) en un bloque de calentamiento establecido en 70 °C. Una vez que la agarose esté completamente fundida, transfiera 600 μl a un tubo fresco de 1,5 ml, agregue 250 μl de medio E3, 50 μl del 0,4% MS-222 y 25 μl de solución de material de cuentas vórcidas.NOTA:</strong…

Materials

Lightsheet Z.1 microscope Carl Zeiss Microscopy
Low melting point agarose Roth 6351.1
Low melting point agarose Sigma A4018 or A9414
Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate (MESAB/ MS-222/Tricaine) Sigma E10521
20 μl (1 mm inner diameter, marked black) capilllaries Brand 701904 sold as spare part for transferpettor
Teflon tip plungers for 20 μl capillarie Brand 701932 sold as spare part for transferpettor

Play Video

Citar este artículo
Light Sheet Microscopy Sample Preparation: Mounting Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20185, doi: (2023).

View Video