라이트 시트 현미경 샘플 준비: 장기 이미징을 위한 살아있는 제브라피시 배아 장착
Published: April 30, 2023
Abstract
출처: Icha J., 외. 이미지 얼룩말 눈 발달에 빛 시트 형광 현미경 현미경 검사를 사용하여. J. 비스 익스프. (2016).
이 문서에서는 광시트 형광 현미경 검사법을 위한 샘플 준비를 설명합니다. 또한 생리적 조건하에서 살아있는 배아의 오랜 시간 경과 영화를 기록 할 수있는 장기 이미징을 위해 살아있는 제브라피시 배아를 장착하는 방법을 보여줍니다.
Protocol
1. 샘플 준비 아가로즈 믹스 준비 아가로즈 믹스를 만들기 전에 15분, 70°C로 설정된 가열 블록에서 1% 낮은 융점 아가로즈(E3 배지에 용해)의 1ml 알리쿼트 1ml를 녹입니다. 아가로즈가 완전히 녹으면 600 μl을 신선한 1.5 ml 튜브로 옮기고, E3 배지 250 μl, 0.4% MS-222 및 25 μl의 소용돌이 구슬 스톡 용액을 추가합니다.참고: 이것은 혼합물의 925 μl을 만들고, 추가 75 ?…
Materials
| Lightsheet Z.1 microscope | Carl Zeiss Microscopy | ||
| Low melting point agarose | Roth | 6351.1 | |
| Low melting point agarose | Sigma | A4018 or A9414 | |
| Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate (MESAB/ MS-222/Tricaine) | Sigma | E10521 | |
| 20 μl (1 mm inner diameter, marked black) capilllaries | Brand | 701904 | sold as spare part for transferpettor |
| Teflon tip plungers for 20 μl capillarie | Brand | 701932 | sold as spare part for transferpettor |
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Light Sheet Microscopy Sample Preparation: Mounting Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20185, doi: (2023).