Preparazione del campione di microscopia a fogli luce: montaggio di embrioni zebrafish vivi per l'imaging a lungo termine
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Icha J., et al. J. Vis. Exp. (2016).
Questo articolo descrive la preparazione del campione per la microscopia a fluorescenza a fogli leggeri. Dimostra anche un metodo per montare embrioni di zebrafish vivi per l’imaging a lungo termine, che consente la registrazione di film a lunga decadere di embrioni vivi in condizioni quasi fisiologiche.
Protocol
1. Preparazione del campione Preparazione del mix di agarosio 15 minuti prima della fabbricazione della miscela di agarosio, sciogliere un’aliquota di 1 ml di agarosio a basso punto di fusione dell’1% (sciolto in mezzo E3) in un blocco riscaldante impostato a 70 °C. Una volta che l’agarosio è completamente fuso, trasferire 600 μl in un tubo fresco da 1,5 ml, aggiungere 250 μl di mezzo E3, 50 μl di 0,4% MS-222 e 25 μl di soluzione di stock di perline vortexate.NOTA:</s…
Materials
| Lightsheet Z.1 microscope | Carl Zeiss Microscopy | ||
| Low melting point agarose | Roth | 6351.1 | |
| Low melting point agarose | Sigma | A4018 or A9414 | |
| Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate (MESAB/ MS-222/Tricaine) | Sigma | E10521 | |
| 20 μl (1 mm inner diameter, marked black) capilllaries | Brand | 701904 | sold as spare part for transferpettor |
| Teflon tip plungers for 20 μl capillarie | Brand | 701932 | sold as spare part for transferpettor |
Citar este artículo
Light Sheet Microscopy Sample Preparation: Mounting Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20185, doi: (2023).