הכנת דגימת מיקרוסקופיה של יריעות אור: הרכבה של עוברי זברה חיים להדמיה ארוכת טווח

Published: April 30, 2023

Abstract

מקור: Icha J., ואח ‘. באמצעות יריעת אור פלואורסצנטי מיקרוסקופיה כדי תמונה זברהפיש פיתוח עיניים. ג’יי ויס אקספ. (2016).

מאמר זה מתאר הכנה לדוגמה עבור מיקרוסקופ פלואורסצנטי גיליון אור. הוא גם מדגים שיטה להרכבת עוברי זברה חיים להדמיה ארוכת טווח, המאפשרת הקלטה של סרטים ארוכי טווח של עוברים חיים בתנאים כמעט פיזיולוגיים.

Protocol

1. הכנה לדוגמה הכנת תערובת אגרוז 15 דקות לפני ביצוע תערובת agarose, להמיס אחד 1 מיליליטר aliquot של 1% נקודת התכה נמוכה agarose (מומס בינוני E3) בבלוק חימום להגדיר 70 °C (70 °F). לאחר agarose הוא מותך לחלוטין, להעביר 600 μl לתוך צינור טרי 1.5 מיליליטר, להוסיף 250 μl של E3 בינוני, 50 μl של 0.4% MS-222 ו 25 μl של פתר…

Materials

Lightsheet Z.1 microscope Carl Zeiss Microscopy
Low melting point agarose Roth 6351.1
Low melting point agarose Sigma A4018 or A9414
Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate (MESAB/ MS-222/Tricaine) Sigma E10521
20 μl (1 mm inner diameter, marked black) capilllaries Brand 701904 sold as spare part for transferpettor
Teflon tip plungers for 20 μl capillarie Brand 701932 sold as spare part for transferpettor

Play Video

Citar este artículo
Light Sheet Microscopy Sample Preparation: Mounting Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20185, doi: (2023).

View Video