شاشة السمية الكيميائية القائمة على الأجنة: تقييم الآثار على تطوير أجنة حمار وحشي
Published: April 30, 2023
Abstract
المصدر: هاو J. وآخرون، على نطاق واسع زيبرافيش القائم في الجسم الحي شاشة جزيء صغير. ج. فيس إكسب. (2010)
في هذه المقالة ، يتم استخدام أجنة حمار وحشي لفحص السمية الكيميائية. ترتبط السمية الكيميائية بقراءات النمط الظاهري. ويبين بروتوكول العينة نهجا منهجيا لإجراء فحص السمية الكيميائية.
Protocol
1. نقل مكتبة الجزيئات الصغيرة في حين يمكن نقل المركب الآلي مع أساليب النقل الروبوتية، وسوف نصف طريقة النقل اليدوي. عادة ما يتم توفير مكتبات الجزيئات الصغيرة في شكل 96 بئرا ، مع تخزين كل مركب في DMSO كمخزون 10 mM. قبل حوالي 60 دقيقة من وصول الأجنة إلى المرحلة التي يتم ف?…
Materials
| Small molecule library of structurally diverse compounds arrayed in a 96-wll format at 10 mM stock in DMSO. Each master plate is aliquoted into 96-well polypropylene storage plates (Corning), and stored at -80°C until use. |
|||
| Drierite | W.A. HAMMOND DRIERITE CO, Xenia, OH | ||
| 12-channel pipettes, 2-20 μL | Eppendorf | ||
| Aluminum sealing tape for 96-well plates | Nunc, Rochester, NY | ||
| DMSO | Sigma, St. Louis, MO | ||
| Basic incubator, 28.5°C | Fisher Scientific | ||
| Polystyrene 96-well round-bottom assay plates | Corning COSTAR; Lowell, MA | ||
| Stereomicroscope with transmitted light base | Leica Microsystems, Bannockburn, IL | ||
| E3 embryo medium: 5 mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl2 , 0.33 mM MgSO4 , containing 0.003% PTU (phenylthiocarbamide, Sigma; St. Louis, MO). | PTU can be prepared as a 10x solution by dissolving 0.3-g PTU in 1 L of E3 embryo media. Solutions containing PTU should be protected from light by covering with aluminum foil. |
Citar este artículo
Embryo-Based Chemical Toxicity Screen: Assessing Effects on Developing Zebrafish Embryos. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20179, doi: (2023).