Göç İnsan T Lenfosit İzolasyon, Kültür ve Analiz In Vitro</em
Summary
T lenfosit göç homing lenfoid organlar, damar çıkış sırasında oluşur ve periferik dokularda girmeden. Burada, T lenfosit göçü analiz etmek için kullanılan bir protokol tarif<em> In vitro</em>.
Abstract
T lenfositlerin göçü, diğer hücrelere veya ekstraselüler matriks proteinleri ile ifade ligandlar hücre yüzeyinde integrinler yapışkan bir etkileşim içerir. Düşük bir yakınlık durumuna hücre öncü afinitesi yüksek bir devlet İntegrinlerin hassas uzaysal aktivasyonu, T lenfosit geçiş için önemli<sup> 1</sup>. Aynı şekilde, hücre firar kenarına çekilmesi, ya da uropod, kalıcı integrin-bağımlı T lenfosit motilite korunmasında gerekli bir adım.<sup> 2</sup>. Lökositlerin aşırı istihdam ve göç inhibe etmek için bir araç olarak otoimmun veya inflamatuar hastalıklar hedef integrinler Birçok terapötik yaklaşımlar<sup> 3</sup>. Insan T lenfosit göçü düzenleyen moleküler olayları incelemek için, biz bir şekilde kullanmış olması<em> In vitro</em> T lenfosit damar alımı sırasında karşılaştığı ortamı taklit eden bir iki boyutlu bir substrat hücre göçü analiz sistemi. T lenfositleri ilk insan donörlerden izole edilir ve yedi ile on gün sonra uyarılmış ve kültür. Tahlil sırasında, T lenfositleri hücrelerarası adezyon molekülü-1 (ICAM-1), LFA-1 integrin için bir ligand ve stromal hücre kaynaklı faktör-1 (SDF-1) ile kaplı bir substrat üzerine yapışır ve göç etmeye izin verilir. Bizim verilerimiz, T lenfositleri ~ 15 mm / dak bir göç hızı sergileyen olduğunu göstermektedir. T lenfosit göç integrin abluka tarafından inhibe olabilir<sup> 1</sup> Veya hücresel actomyosin makine inhibitörleri ile hücre göçü düzenleyen<sup> 2</sup>.
Protocol
Discussion
Bu deneyde, birincil insan T lenfosit motilite analiz etmek için basit bir sistem hakkında ayrıntılı bilgi sağlar. In vitro göç deneyleri, çeşitli hücre tipleri hareketine katılan birçok moleküller ve sinyal yolları rolleri incelemek kullanılmıştır . Bizim protokol kendi deney tasarımı akılda tutulması gereken bazı kritik kontrolleri şunlardır: 1), sığır serum albumini (BSA) veya poli-L lisin (PLL) gibi yapışkanlı olmayan veya non-integrin yapışkan substrat kaplamalar, sırası…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu proje, Ulusal Sağlık Grants HL087088 (MK) Enstitüleri ve HL18208 (MK) tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| RPMI 1640 | Gibco | 11875 | ||
| FBS | Thermo Scientific | SH300070.03 | ||
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140 | ||
| 1-Step Polymorphs | Accurate Chemical | AN221725 | ||
| PHA | Remel/Fisher Scientific | R30852801 | ||
| Rec. human IL-2 | R&D Systems | 202-IL | ||
| Rec. human IL-15 | R&D Systems | 247-IL | ||
| Protein G | Sigma Aldrich | 19459 | ||
| Rec. human ICAM-1/Fc | R&D Systems | 720-IC | ||
| Rec. human SDF-1 | R&D Systems | 350-NS |
Referencias
- Hyun, Y. M., Chung, H. L., McGrath, J. L., Waugh, R. E., Kim, M. Activated integrin VLA-4 localizes to the lamellipodia and mediates t cell migration on VCAM-1. J Immunol. 183, 359-369 (2009).
- Morin, N. A., Oakes, P. W., Hyun, Y. M., Lee, D., Chin, Y. E., King, M. R., Springer, T. A., Shimaoka, M., Tang, J. X., Reichner, J. S., Kim, M. Nonmuscle myosin heavy chain IIA mediates integrin LFA-1 de-adhesion during T lymphocyte migration. The Journal of experimental medicine. 205, 195-205 (2008).
- Hyun, Y. M., Lefort, C. T., Kim, M. Leukocyte integrins and their ligand interactions. Immunologic research. , (2009).
