Misurare la rigidezza flessionale di cellule batteriche Utilizzando una trappola ottica

Crescere le cellule di E. coli in brodo Luria-Beltrani (LB), medio-fase esponenziale (OD = 0,2-0,4). Far crescere la coltura in LB integrata con 50 mg / ml di cefalexina per 15 minuti per indurre la crescita filamentosa, e poi concentrare la cultura di 5 volte tramite centrifugazione. Fai PEI rivestite da copri scorre 1% polyethylenimine diluito in acqua in una camera di flusso, e lavare con acqua dopo 5 minuti di incubazione. Flusso della cultura concentrato di cellule nella camera, e lavato con una miscela di LB e cefalexina (50μg/mL) dopo 3 min per rimuovere le cellule senza legami. Incubare la camera a 37 ° C per 30 min-1 ora per far crescere le cellule attaccato prima di posizionarlo nello strumento ottico cattura. Fai polilisina rivestite perle incubando 0,5 micron di diametro perle di polistirene (Labs Bangs) nel 0,1% polilisina diluito in acqua per 30 min. Quindi lavare le perline 3 volte e risospendere in acqua. Diluire il tallone di un fattore due in LB con cefalexina (50μg/mL), e aggiungerlo nella camera di flusso. Otticamente intercettare un galleggiante tallone e toccare alla punta libera di una cella. (Usiamo un Mad City Labs fase piezoelettrici per il controllo del moto del campione.) Quando una combinazione adatta perla / cellula viene trovato, lavare la camera con cefalexina in LB (50μg/mL) per rimuovere perline separati. Eseguire programma appositamente scritto LabView di applicare forze di piegatura alla cella e registrare forza-spostamento dei dati. Dettagli del programma Calibrare la risposta del rivelatore da raster scansione del tallone allegato all'interno del raggio laser di rilevamento e la registrazione di segnali in tensione 3D PSD. Identificare asse lungo cellula immagine al microscopio. Spostare celle a passi in una direzione perpendicolare all'asse lunga cella. Registrare la distanza percorsa e lo spostamento dalla trappola ottica. Conversione spostamento di forza applicata con la rigidità trappola precedentemente misurati e salvare spostamento punta e forza in un file. Segreti di successo: Nel passaggio 8), si ha la necessità di trovare una cella con un ben definito fine bloccato. Alcune cellule sono semplicemente bloccati in una sola punta, e la forza di piega alla punta che conduce a un insieme di cellule girevole, piuttosto che piegarsi. Una coppia adatta si trova piegando ogni cella rapidamente a mano utilizzando il joystick controllato movimento palco. Rappresentante dei risultati: Figura 1. La figura mostra forza-spostamento di dati per una singola cella. La pendenza di questa linea è la rigidezza flessionale della cellula.