Disección de la glándula linfática larvaria: Aislar el órgano productor de hemocitos de Drosophila

Published: April 30, 2023

Abstract

Fuente: Reimels, T. A. y Pfleger, C.M. Métodos para examinar la glándula linfática y los hemocitos en larvas de Drosophila. J. Vis. (2016).

Este video describe la glándula linfática Drosophila —el sitio primario de la hematopoyesis en la larva de mosca— y muestra un protocolo de ejemplo para diseccionar y montar el órgano para la inmunohistoquímica y las imágenes fluorescentes.

Protocol

Este protocolo es un extracto de Reimels y Pfleger, Methods to Examine the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae, J. Vis. Exp. (2016). 1. Inmunohistoquímica de la glándula linfática larvaria NOTA: La glándula linfática se encuentra aproximadamente a un tercio de longitud del extremo anterior de una larva ligeramente por debajo del cerebro en el lado dorsal. (Véase la flecha en la Figur…

Representative Results

Figura 1: Melanización de celda de cristal vivo. A) Las larvas se colocaron individualmente en tubos PCR antes del calentamiento. Las flechas rojas indican larvas que no están en la parte inferior de los tubos. B) Un patrón típico de melanización de células cristalinas después del calentamiento, que a veces revela la glándula linfática (flecha; lado dorsal mostrado, ante…

Materials

PBS tablets MP Biomedicals 2810305
dissecting dish Corning 7220-85
microcentrifuge tube Denville C2170
silicone dissecting pad, made from Sylgard 184 kit Krayden (distributed through Fisher) NC9644388 (Fisher catalog number) Made in petri dish by mixing components of Sylgard elastomer kit according to manufacturer instructions.
stereomicroscope Morrell Instruments (Nikon distributor) mna42000, mma36300 Nikon models SMZ1000 and SMZ645
tissue wipe VWR 82003-820
forceps Electron Microscopy Sciences 72700-DZ
p200 pipette Eppendorf 3120000054
formaldehyde Fisher BP531-500
Triton Fisher BP151-500
Tween 20 Fisher BP337-500
bovine serum albumin Rocky Mountain Biologicals BSA-BSH-01K
normal goat serum Sigma G9023-10ML
normal donkey serum Sigma D9663-10ML
200 proof ethanol VWR V1001
N-propyl gallate MP Biomedicals 102747
glycerol VWR EM-4750
DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole) Fisher 62248
microscope cover glass, 18 mm circular Fisher 12-545-100
glass microscope slides Fisher 22-034-980
24-well plate Corning 351147
disposable transfer pipet Fisher 13-711-9AM
fluorescence microscope Zeiss Axio Imager.Z1

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Citar este artículo
Larval Lymph Gland Dissection: Isolating the Drosophila Hemocyte-Producing Organ. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20117, doi: (2023).

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