Larvale lymfklierdissectie: het isoleren van het Drosophila Hemocyt-producerende orgaan
Published: April 30, 2023
Abstract
Bron: Reimels, T. A. en Pfleger, C.M. Methoden om de lymfklier en hemocyten in drosophilalarven te onderzoeken. J.Vis. Exp. (2016).
Deze video beschrijft de Drosophila-lymfklier – de primaire plaats van hematopoiese in de vlieglarve – en toont een voorbeeldprotocol om het orgaan te ontleden en te monteren voor immunohistochmie en fluorescerende beeldvorming.
Protocol
Dit protocol is een fragment uit Reimels en Pfleger, Methods to Examine the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae, J. Vis. Exp. (2016). 1. Larvale Lymfklier Immunohistochie OPMERKING: De lymfeklier bevindt zich ongeveer een derde lengte van het voorste uiteinde van een larve iets onder de hersenen aan de dorsale kant. (Zie pijl in figuur 1B.) De lymfeklier flankeert…
Representative Results
Figuur 1: In Vivo Crystal Cell Melanisatie. A) Larven werden vóór het verwarmen afzonderlijk in PCR-buizen geplaatst. Rode pijlen wijzen op larven die zich niet aan de onderkant van de buizen bevinden. B) Een typisch kristalcelmelanisatiepatroon na verhitting, dat soms de lymfeklier onthult (pijl; dorsale kant getoond, voorste is links). Schaalbalk staat voor 1 mm. <a href="htt…
Materials
| PBS tablets | MP Biomedicals | 2810305 | |
| dissecting dish | Corning | 7220-85 | |
| microcentrifuge tube | Denville | C2170 | |
| silicone dissecting pad, made from Sylgard 184 kit | Krayden (distributed through Fisher) | NC9644388 (Fisher catalog number) | Made in petri dish by mixing components of Sylgard elastomer kit according to manufacturer instructions. |
| stereomicroscope | Morrell Instruments (Nikon distributor) | mna42000, mma36300 | Nikon models SMZ1000 and SMZ645 |
| tissue wipe | VWR | 82003-820 | |
| forceps | Electron Microscopy Sciences | 72700-DZ | |
| p200 pipette | Eppendorf | 3120000054 | |
| formaldehyde | Fisher | BP531-500 | |
| Triton | Fisher | BP151-500 | |
| Tween 20 | Fisher | BP337-500 | |
| bovine serum albumin | Rocky Mountain Biologicals | BSA-BSH-01K | |
| normal goat serum | Sigma | G9023-10ML | |
| normal donkey serum | Sigma | D9663-10ML | |
| 200 proof ethanol | VWR | V1001 | |
| N-propyl gallate | MP Biomedicals | 102747 | |
| glycerol | VWR | EM-4750 | |
| DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole) | Fisher | 62248 | |
| microscope cover glass, 18 mm circular | Fisher | 12-545-100 | |
| glass microscope slides | Fisher | 22-034-980 | |
| 24-well plate | Corning | 351147 | |
| disposable transfer pipet | Fisher | 13-711-9AM | |
| fluorescence microscope | Zeiss | Axio Imager.Z1 |
Citar este artículo
Larval Lymph Gland Dissection: Isolating the Drosophila Hemocyte-Producing Organ. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20117, doi: (2023).