Дрозофила Нейромышечная развязка (NMJ) Количественная оценка: Метод оценки синаптической морфологии и функции
Published: April 30, 2023
Abstract
Источник: Кастельс-Нобау, A., и др. Два алгоритма для высокой пропускной способности и мульти-параметрической количественной оценки Drosophila нервно-мышечной морфологии соединения. J. Vis. Exp. (2017).
Нейромышечное соединение Drosophila (NMJ) используется в качестве модели для изучения морфологии и функции синапсов. Это видео описывает важные особенности, которые исследователи количественно охарактеризовать NMJ. Пример протокола демонстрирует программное обеспечение, способное выполнять количественную оценку автоматически.
Protocol
Этот протокол является выдержка из Кастельс-Нобау и др.,Два алгоритма для высокой пропускной способности и многопаметрической количественной оценки Drosophila N евромышечнойморфологии соединения, J. Vis. Exp. (2017). 1. Требования до обработки изображений Выполн…
Representative Results
Рисунок 1: Примеры неуместных результатов макро сегментации. Результат изображения после запуска”Drosophila NMJ Morphometrics” или”Drosophila NMJ Бутон Morphometrics”. Части синаптической терминала не включены в желтый контур(A). Части фона…
Materials
| Immunostaining | Dilution | ||
| Mouse anti-discs large 1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | AFFN-DLG1-4D6 | 1/25 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Rabbit anti-horseradish peroxidase | Jackson IR | 323-005-021 | 1/500 |
| Rabbit anti-Synaptotagmin | Gift from Hugo Bellen | Jan-00 | |
| Mouse anti-Cysteine string protein | Developmental Studies Hybridoma Bank | DCSP-1(ab49) | 1/10 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Mouse anti-Bruchpilot | Developmental Studies Hybridoma Bank | nc82 | Jan-50 |
| Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 | Life technologies | A11029 | 1/200 |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 568 | Life technologies | A11011 | 1/500 |
| Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling Kit | ThermoFisher | Z25006 | |
| ProLong Gold Antifade Mountant | ThermoFisher | P36930 | |
| Equipment | |||
| Confocal microscope or fluorescence microscope | Leica SP5 | ||
| Zeiss Axio imager | |||
| Computer | Mac or Pc | ||
| Software | |||
| FIJI |
Citar este artículo
Drosophila Neuromuscular Junction (NMJ) Quantification: A Method to Assess Synaptic Morphology and Function. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20107, doi: (2023).