Drosophila Quantificação da Junção Neuromuscular (NMJ): Um método para avaliar a morfologia e a função sinapática
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Castells-Nobau, A., et al. Dois Algoritmos para Alta produtividade e Quantificação Multi-paramétrica da Morfologia da Junção Neuromuscular Drosophila . J. Vis. Exp. (2017).
A junção neuromuscular Drosophila (NMJ) é usada como modelo para estudar a morfologia e a função das sinapses. Este vídeo descreve características importantes que os pesquisadores quantificam para caracterizar o NMJ. O protocolo de exemplo demonstra um software capaz de realizar a quantificação automaticamente.
Protocol
Este protocolo é um trecho de Castells-Nobau et al., Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology, J. Vis. Exp. (2017). 1. Requisitos antes do processamento de imagens Realize os preparativos do livro aberto de Drosophila da terceira larva errante instar (L3), como descrito anteriormente. Terminais de NMJ de co-imuno-immunolabel Drosophila utilizando uma …
Representative Results
Figura 1: Exemplos de resultados inadequados de macro segmentação. Imagens de resultado após executar “Drosophila NMJ Morphometrics” ou “Drosophila NMJ Bouton Morphometrics”. Partes do terminal sináptico não estão incluídas no contorno amarelo (A). Partes do fundo estão incluídas no terminal sináptico pelo contorno amarelo(B). Linha de esqueleto azul se estende…
Materials
| Immunostaining | Dilution | ||
| Mouse anti-discs large 1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | AFFN-DLG1-4D6 | 1/25 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Rabbit anti-horseradish peroxidase | Jackson IR | 323-005-021 | 1/500 |
| Rabbit anti-Synaptotagmin | Gift from Hugo Bellen | Jan-00 | |
| Mouse anti-Cysteine string protein | Developmental Studies Hybridoma Bank | DCSP-1(ab49) | 1/10 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Mouse anti-Bruchpilot | Developmental Studies Hybridoma Bank | nc82 | Jan-50 |
| Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 | Life technologies | A11029 | 1/200 |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 568 | Life technologies | A11011 | 1/500 |
| Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling Kit | ThermoFisher | Z25006 | |
| ProLong Gold Antifade Mountant | ThermoFisher | P36930 | |
| Equipment | |||
| Confocal microscope or fluorescence microscope | Leica SP5 | ||
| Zeiss Axio imager | |||
| Computer | Mac or Pc | ||
| Software | |||
| FIJI |
Citar este artículo
Drosophila Neuromuscular Junction (NMJ) Quantification: A Method to Assess Synaptic Morphology and Function. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20107, doi: (2023).