分析用超遠心器(AUC)サンプルセルは、サンプルとリファレンスバッファを保持し、実験中に、最大60,000 RPMまで高真空およびローター速度にさらされています。このビデオでは、AUCの実験のこの非常に重要なコンポーネントの組立、荷重と位置合わせのために必要な細部への厳格な注意を紹介します。
分析用超遠心器(AUC)は、私たちは高速遠心分離中に高分子の沈降プロファイルを記録することができる強力な生物物理学的なツールです。適切に計画して実行すると、AUCの沈降速度や沈降平衡実験では、サイズと形状に関しての蛋白質、サンプルの純度、沈降係数、オリゴマー化状態とタンパク質間相互作用について多くを明らかにすることができます。
この手法は、しかし、技術的な関心の厳格なレベルを必要とします。サンプルセルは2つのウィンドウのアセンブリの間に挟まれたセクタセンターピースを保持する。これらは、/ポンドで約120から140のトルクの圧力で密封されています。速度で回転しながら光検出システムが、各中核部門を通して、同じラジアルパスの正中線でのサンプルとリファレンスバッファの両方をスキャンするように、リファレンスバッファおよびサンプルは、目玉のセクターにロードされ、その後、シールした後、細胞を正確にチタン製ローターに並んでいる最大60、000 rpmまでと非常に高真空下での
だけでなく、重要な、適切な試料セルのアセンブリは、サンプルの細胞成分は非常に高価であり、されており、彼らが実験中に漏れや破損を避けるために最適な作業状態であることを確認するため、適切に世話をする必要があります。少しでも亀裂や傷が遠心分離機の破損につながることができるため、慎重に窓を扱う。目玉と窓の間の接触はできるだけタイトにする必要があります。トルクの圧力が印加された後、すなわち無ニュートンのリングが見えるはずです。ほこり、糸くず、窓やセンターピースのどちらかの傷や油のすべての妥協この接触と非常に簡単にすべて一緒に1つのセクタから別のソリューションの漏洩または中心から漏れにつながることができます。貴重なサンプルは、実験中のソリューションの漏出、失われる多くの場合、壊れた窓やセンターピースにつながる細胞内の圧力の不均衡の原因となるだけでなく。さらに、プラグのガスケットとハウジングのプラグは、遠心分離室内の高真空での読み込み穴から目玉の部門から引き出されているソリューションを避けるために、所定の位置にしっかり必要があります。ウィンドウのライナーやガスケットは、壊れた窓、結果として運動を引き起こす可能性のある休憩やクラックのない状態でなければなりません。
このビデオでは、コンポーネントの損傷、完璧なAUCの実験中に、ソリューション漏れや破損を最小限にするためにサンプルセルアセンブリ、トルク、負荷及びローターの配置の私たちの手順をデモンストレーションを行います。
ローターの適切なセルアセンブリ、サンプルの挿入、およびセルの配置は、高品質のAUCの実験のための非常に重要です。これは、タンパク質の相互作用を研究し、トレース集計量を決定するなどの高分子の沈降プロファイルの取得したデータを、、の非常に詳細な分析を必要とする実験のために、特に、真です。多くの場合、実験の品質は、AUCの研究の結果の正確さと精度のために制限しています。 3 – 実用的な設計とAUCの実験のさらなる実行の詳細については、参考文献1を参照してください。実用的なセットアップをカバーするワークショップ、理論、およびAUCの実験のデータ解析は、国立衛生研究所の研究室[4] 1年に2回程度開催されている。
我々は、NIBIB、NIHの学内研究プログラムで研究支援を認める。
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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4-place Ti analytical rotor | Beckman Coulter | 361964 | ||
Torque stand assembly | Beckman Coulter | 361318 | ||
Cell alignment tool | Beckman Coulter | 362340 | ||
Spinkote Lubricant | Beckman Coulter | 306812 | ||
Counterbalance | Beckman Coulter | 360219 | ||
Cell Housing kit | Beckman Coulter | 334602 | ||
Window gasket | Beckman Coulter | 327021 | ||
Window liner | Beckman Coulter | 362329 | ||
Window, sapphire | Beckman Coulter | 307177 | ||
Window, quartz | Beckman Coulter | 301730 | ||
Window holder | Beckman Coulter | 305037 | ||
12mm double sector Epon centerpiece | Beckman Coulter | 306493 | ||
Cell plug gaskets | Beckman Coulter | 327022 | ||
Cell housing plug | Beckman Coulter | 362327 |