小鼠腹膜腔细胞的分离
Summary
在哺乳动物的腹腔中包含不同的免疫细胞群的先天免疫反应的关键。这些细胞的生化和功能分析的一个有效的隔离方法是必需的。在这里，我们提供一个全面的方法在小鼠腹腔细胞隔离。
Abstract
腹膜腔是腹腔膜结合的充满液体的哺乳动物，其中包含的肝，脾，大部分的胃肠道和其他脏器。港口包括巨噬细胞，B细胞和T细胞的免疫细胞的数量。一个天真腹腔巨噬细胞大量存在，使一个天真的组织驻地巨噬细胞（1）收集的首选网站。腹膜腔是因为存在一个独特的腹腔居民的B细胞为B1细胞除了常规B2细胞的一个子集B细胞的研究也很重要。 B1细胞分为菌素和B1B细胞，它可以通过表面的CD11b和CD5表达尊敬。 B1单元格是一个由多种病原体（2-4）早期保护自然提供的IgM的重要来源。这些细胞是自身反应（5）性质，但它们是如何控制，以防止自身免疫性疾病仍然是不完全理解。相反，CD5<sup> +</sup凭借他们的IL – 10的生产能力（6）>阿维菌素B1a的细胞具有一定的调节特性。因此，腹腔B1细胞研究，因为他们的不同的功能和与他们的发展及规管相关的许多未解决的问题是一个有趣的细胞群。腹腔居民的免疫细胞的分离是非常棘手，因为缺乏一个定义的结构腹腔内。我们的协议，将描述一个获得可行的免疫细胞，从小鼠的腹腔，然后可以使用的表型分析，流式细胞仪和不同的生化和免疫学检测程序。
Protocol
Discussion
腹腔细胞的分离，不同的免疫细胞，主要是巨噬细胞和特定的B细胞亚群的研究是一个重要的技术。虽然这是一个简单的过程，也有一些涉及的关键步骤。应避免污染所收集的样品中血液的存在，获得纯腹腔细胞群。颈椎脱位安乐死应做仔细，以避免在腹腔的血液污染。或者可以使用的CO 2。此外，在手术过程中适当的照顾中应采取，以避免在腹腔穿刺膀胱或任何其他机关。注入流体恢复大部分也是很重要的细胞产量。
此过程被广泛用于研究自中等数量的居民巨噬细胞生物学，未刺激巨噬细胞可以很容易地获得从腹腔，在髓系祖细胞在体外分化成成熟的巨噬细胞，巨噬细胞集落刺激因子（8费力的任务，9）。从腹腔巨噬细胞的产量可以提高使用硫乙醇酸盐启发式，虽然硫乙醇酸盐的使用可能会改变的巨噬细胞的生理特性（7）。
B细胞是先天和适应性免疫中扮演关键角色，我们的免疫系统的重要组成部分。在不同的B细胞亚群，B1细胞构成独特的先天免疫，自身免疫和免疫调节B细胞参与的一个子集。 B1细胞主要位于腹腔和自我补充。它们是自然的IgM它提供了针对病毒和细菌（10-12）保护的第一线的主要生产商之一。 B1细胞的IL – 10（6），这是一个重要的细胞因子参与免疫调节的主要来源。虽然几项研究已经与B1单元格的追求，仍然有余地为进一步评价其对比功能，特别是其监管作用。腹腔细胞的分离方法研究B1细胞的功能提供了独特的机会。
Acknowledgements
这项工作是支持部分由美国国立卫生研究院授予AI069358和BloodCenter研究基金会。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Thioglycollate Medium, Brewer Modified | BD BBL | 211716 |
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