Повышенные Плюс Лабиринт для мышей

Хотя генома мыши была последовательной, функции большинства генов не известны. Методы генетической модификации, позволяющие исключить или других манипуляций определенный ген у мышей (Остин и др., 2004;.. Айба и др., 2007). Влияние данного гена на определенное поведение может быть определена путем проведения поведенческого анализа мутантных мышей (Такао и Миякава, 2006b;. Такао и др., 2007).

Приподнятого крестообразного лабиринта тест является одним из самых популярных тестов всех имеющихся в настоящее время животных моделях тревоги (Роджерс и Dalvi, 1997; Кроули, 2007). Этот тест для беспокойства-подобное поведение был использован для скрининга и фенотипирование трансгенных и нокаутных мышей (Кроули, 1999) и для открытия новых лекарств (Хогг и др., 1996;. Кроули, 2007). Приподнятого крестообразного лабиринта тест имеет сильную прогностическая валидность для скрининга анксиолитического средства (Роджерс и Dalvi, 1997; Mechiel Корте и Де Бур, 2003; Кроули, 2007); анксиолитическое наркотики специально увеличиваться, и anxiogenic наркотики специально уменьшаться, количество записей в распростертыми объятиями и время, проведенное там. Общий балл записей и общее расстояние считаются полезными индекса общей активности. Общий счет записи также индекс тревожности, и проценты от записи и время, проведенное в каждой руке составляют индекс первичной тревоги (Роджерс и Dalvi, 1997, Mechiel Корте и Де Бур, 2003). Открытые и закрытые оружия считаются вызывают такое же поисковой диска, поэтому избежании объятиями, как полагают, в результате индукции более высокие уровни страха (Роджерс и Dalvi, 1997). Считается, что неприятие мышей для изучения объятиями лабиринта вызвано боязнь открытых пространств и повышенный.

В 1984 году Хэндли и Mithani сообщил о предварительной работе с повышенной X (плюс) лабиринт испытанию, описанному выше. Оригинальные испытательной аппаратуры был поднят 70 см над полом, и состоял из двух закрытых и два открытых оружия, каждое из которых измеряется длиной 45 см на 10 см в ширину. В своих первоначальных исследований, они сообщили, число открытой / всего записей руки (Хэндли и Mithani, 1984). Впоследствии другие показатели были разработаны, которые включали количество записей в закрытые и открытые руки и время, проведенное в закрытых и открытых оружие для крыс (Пеллоу и др., 1985; Пеллоу и файлов, 1986) и мышей (Lister, 1987) .

Изменения приподнятого крестообразного лабиринта тест включены удлинение и объятьями (50 х 10 см) и закрылся оружия (50 х 10 х 40 см), с высокими стенами и открытой крышей на закрытой руки и весь лабиринт был возведен на высоту до 50 см (Пеллоу и др., 1985; Пеллоу и файлов, 1986). В настоящее время в нашей лаборатории, приподнятого крестообразного лабиринта испытательной аппаратуры настраивается в форме + с двумя объятиями (25 х 5 см, с очень небольшим, 0,5-см, стенки) друг напротив друга и перпендикулярной к двум закрыты оружия (25 х 5 х 16 см), и поднял 50 см над уровнем пола (Миякава и др., 1996; Manabe и др., 2000; Миякава и др., 2001; Сигер и др., 2004; Моришима и др., 2005; Миямото и др., 2005; стрелки и др., 2006; Хаттори и др., 2007; Ниманн и др., 2007; Сано и др., 2008; Horii и др., 2008; Фукуда и др., 2008; Икеда и др.; 2008). Мышь находится в центре + (5 см х 5 см) и имеет право исследовать лабиринт свободно. Хотя 5 мин записи является обычным явлением, поведение фиксируется в течение 10 минут в нашем протоколе увеличить возможность обнаружить фенотипа. Открытые и закрытые повышенных оружия вызывают исследования конфликтов (Mechiel Корте и Де Бур, 2003; Кроули, 2007).

Меры приподнятого крестообразного лабиринта теста фиксируются наблюдателем во время эксперимента. В нашей лаборатории тест, записанные с видеокамеры, подключенной к компьютеру и поведенческие данные (изображения EP) приобретаются и проанализированы с помощью программы изображения EP. Количество записей на объятиями против общее количество записей руку, и время, затраченное на объятиями по сравнению с закрытыми руками, обеспечить меры тревожно-подобное поведение.

Мы оценили более 90 штаммов генно-инженерного мутантных мышей, используя протокол показано в фильме и имеют большой набор исходных данных для более чем 5000 мышей (в том числе дикого типа и мутантных мышей). В нашей тестовой батареи, дикого типа помета, как правило, используется в качестве контроля. Как фон напряжения, C57BL/6J мышей широко используются. Мы собрали данные мышей C57BL/6J в поведенческих тестах. Значений, полученных от мышей C57BL/6J в нашей приподнятого крестообразного лабиринта тест выглядит следующим образом (п = 914, средний SEM); общее расстояние, пройденное: 1547,55 14,27 см, длительность времени, потраченного: 56,49 +2,42 с (объятиями), 384,02 3,13 сек (закрытые оружия), 161,90 2,17 с (лабиринт в центре); соотношение времени, проведенного в объятиями: 9.19 0.36%, соотношение времени, проведенного в закрытом оружия: 63,82 +0,52%, количество записей: 7.64 0.21 (объятиями), 24,32 0,28 (закрытые оружия);% открытых записей руку: 21,9 0,05% закрытого оружия записи: 78,1 0.05. C57BL/6J мышей тратить меньше времени на объятия, чем в закрытых оружия (р <0,0001, п = 914, парных т тEST). Это означает, что C57BL/6J мышей правило, чтобы избежать распростертыми объятиями, и что время, проведенное в объятиями является допустимым индексом тревожно-подобное поведение. Кроме того, порядок испытаний уравновешивается через генотипов, потому что судебный процесс влияет количество времени, проведенного в объятиями и центр платформы. То есть, все индексы роста в течение 3 и 4 мышей по сравнению с первым мышей (р = 0,0089, п = 476) (неопубликованные данные). С нашей протокол, анализа более чем 1661 мышах показали, что последовательный порядок мышах испытания в клетке не оказывает существенного влияния открытое время пребывания руки (неопубликованные данные). То есть, выступления первых мышей, взятых из клетки существенно не отличается от второго, третьего или последнего мышей.

Хотя приподнятого крестообразного лабиринта и тест светлый / темный переход теста оба используются для оценки тревоги, как поведение, результаты не всегда согласуются между ними (Holmes и др., 2000; Tujimura и др., 2008; Накаджима и др., в печати ) Например, передний мозг конкретных кальциневрина-нокаутных мышей тратить уменьшилось количество времени в свет камеры в светлый / темный переход тест, но увеличилось количество времени в объятиями в приподнятого крестообразного лабиринта тест (Миякава и соавт. , 2003). Факторный анализ наши поведенческие батареи тест показывает, что повышенный плюс тест лабиринт и светлый / темный переход тест оценки различных аспектов тревоги, как поведение, например, ярко-пространство беспокойство в светлый / темный переход тестирования и открытого пространства, тревоги, как поведение в открытых полевых испытаний (Такао и Миякава, 2006b; Ямасаки и др., 2006). Таким образом, как светлый / темный тест перехода и приподнятого крестообразного лабиринта тест включены в наши поведенческие тест батареи.

Крэбб и коллеги сообщили, что неконтролируемые переменные и экспериментов характеризующие мутанты могут дать результаты, которые являются специфическими для конкретной лаборатории (Крэбб и соавт., 1999). Процедурные различия, существующие между лабораториями сделать его трудно воспроизвести или сравнить результаты между ними. Создание визуальных документации протокол будет способствовать лучшему пониманию экспериментальные процедуры, позволяющие по стандартизации протоколов, используемых по всей лаборатории и для сравнения поведенческих фенотипов различных штаммов мутантных мышей оценивали с помощью этих тестов. Мы ранее опубликованных фильм протокол светлый / темный переход тест (Такао и Миякава, 2006a). Кроме того, фильмы других протоколов, например, для открытых полевых испытаний, porsolt вынуждены плавать тест, и страх кондиционирования тестов, которые мы используем в наших поведенческих тест батареи в настоящее время делается для публикации в качестве будущих журнальных статей видео.