Elevated Maze Plus pour Souris

Bien que le génome de la souris a été séquencé, les fonctions de la plupart des gènes ne sont pas connus. Techniques de modification génétique permettent d'effacement ou de toute autre manipulation d'un gène spécifique chez la souris (Austin et al, 2004;.. Aiba et al, 2007). L'influence d'un gène donné sur un comportement spécifique peut alors être déterminée par des analyses comportementales des souris mutantes (Takao et Miyakawa, 2006b;. Takao et al, 2007).

Le test du labyrinthe surélevé est l'un des tests les plus populaires de tous les modèles animaux actuellement disponibles de l'anxiété (Rodgers et Dalvi, 1997; Crawley, 2007). Ce test d'anxiété comme le comportement a été utilisé pour le dépistage et le phénotypage des souris transgéniques et knock-out (Crawley, 1999) et pour la découverte de médicaments (Hogg et al 1996;. Crawley, 2007). Le test du labyrinthe surélevé a une validité prédictive forte pour le dépistage des drogues anxiolytiques (Rodgers et Dalvi, 1997; Mechiel Korte et De Boer, 2003; Crawley, 2007); anxiolytiques augmenter spécifiquement, et de médicaments anxiogènes spécifiquement baisse, le nombre d'entrées en les bras ouverts et le temps passé là-bas. Le score total des entrées et la distance totale est considérée comme un indice utile de l'activité générale. Score total des entrées est également un indice d'anxiété, et les pourcentages des entrées et le temps passé dans chaque bras constituent l'indice d'anxiété primaire (Rodgers et Dalvi 1997, Mechiel Korte et De Boer, 2003). Les bras ouverts et fermés sont considérés pour évoquer le même lecteur exploratoires, par conséquent d'éviter les bras ouverts est considéré comme un résultat de l'induction de niveaux plus élevés de la peur (Rodgers et Dalvi, 1997). On pense que l'aversion de la souris pour explorer les bras ouverts du labyrinthe est causée par la peur des espaces ouverts et surélevée.

En 1984, Handley et Mithani rapport sur les travaux préliminaires avec le test de X élevées labyrinthe (plus) décrit ci-dessus. L'appareil d'essai d'origine a été soulevée de 70 cm au-dessus du sol, et comprenait deux fermés et les deux bras ouverts, dont chacun mesure 45 cm de long par 10 cm de large. Dans leurs études initiales, ils ont signalé le rapport entre les entrées bras ouvert / total (Handley et Mithani, 1984). Par la suite, d'autres indices ont été développés qui comprenait le nombre d'entrées dans les bras fermés et ouverts et le temps passé dans les bras ouverts et fermés pour les rats (Pellow et al, 1985; Pellow et File, 1986) et la souris (Lister, 1987) .

Les modifications apportées au test du labyrinthe en plus élevés notamment l'allongement des deux les bras ouverts (50 x 10 cm) et les bras fermés (50 x 10 x 40 cm) avec de grands murs d'enceinte et un toit ouvert sur les bras fermés, et le labyrinthe a été élevé à une hauteur de 50 cm (Pellow et al, 1985; Pellow et File, 1986). Actuellement, dans notre laboratoire, les appareils de plus de élevés test du labyrinthe est configuré sous la forme d'un +, avec deux bras ouverts (25 x 5 cm, avec une très légère, de 0,5 cm, le mur) à travers les uns des autres et perpendiculaires à deux bras fermés (25 x 5 x 16 cm), et est soulevée de 50 cm au-dessus du sol (Miyakawa et al, 1996; Manabe et al, 2000; Miyakawa et al, 2001; Seeger et al, 2004; Morishima et al, 2005; Miyamoto et al, 2005; Arrow et al, 2006; Hattori et al, 2007; Niemann et al, 2007; Sano et al, 2008; Horii et al, 2008; Fukuda et al, 2008; Ikeda et al, 2008). La souris est placée dans le centre de l'+ (5 cm x 5 cm) et est autorisé à explorer le labyrinthe librement. Bien que 5 minutes d'enregistrement est commun, le comportement est enregistrée pendant 10 min dans notre protocole pour augmenter la possibilité de détecter le phénotype. Les bras ouverts et fermés élevées induisent un conflit d'exploration (Mechiel Korte et De Boer, 2003; Crawley, 2007).

Les mesures du test du labyrinthe, plus élevés sont enregistrés par un observateur lors de l'expérience. Dans notre laboratoire, le test est enregistrée avec une caméra vidéo reliée à un ordinateur et les données comportementales (Image EP) sont acquises et analysées en utilisant le programme PE image. Nombre d'entrées sur les bras ouverts par rapport au nombre d'entrées au total le bras, et le temps passé sur les bras ouverts par rapport aux bras fermés, fournissent les mesures de l'anxiété-comme le comportement.

Nous avons évalué plus de 90 souches de souris mutantes transgéniques en utilisant le protocole indiqué dans le film et ont un grand ensemble de données brutes de plus de 5000 souris (y compris de type sauvage et des souris mutantes). Dans notre batterie de tests, sœurs de type sauvage sont généralement utilisées comme contrôle. Comme une souche de fond, des souris C57BL/6J sont largement utilisés. Nous avons recueilli les données de la souris C57BL/6J dans les tests comportementaux. Les valeurs obtenues à partir des souris C57BL/6J dans notre test du labyrinthe surélevé sont les suivants (n = 914, moyenne SEM), la distance totale parcourue: 1547,55 14,27 cm; durée du temps passé: 56,49 2,42 s (bras ouverts), 384,02 3,13 s (bras fermés), 161,90 2,17 s (centre labyrinthe), ratio du temps passé dans les bras ouverts: 9,19 0,36%, le ratio du temps passé dans les bras fermés: 63.82 0.52%, le nombre d'entrées: 7,64 0,21 (bras ouverts), 24.32 0.28 (bras fermés); entrées% bras ouvert: 21,9 0,05% Fermé les entrées d'armes: 78.1 0.05. Souris C57BL/6J passer moins de temps dans les bras ouverts que dans les bras fermés (p <0,0001, n = 914, jumelé-t tHNE). Cela indique que des souris C57BL/6J ont tendance à éviter les bras ouverts, et que le temps passé dans les bras ouverts est un indice valable de l'anxiété comme le comportement. De plus, l'ordre des essais est contrebalancée travers génotypes, car le numéro d'essai influe sur le temps passé dans les bras ouverts et la plate-forme centrale. Autrement dit, les indices de toutes les augmenter au cours des 3ème et 4ème souris par rapport à la 1ère souris (p = 0,0089, n = 476) (données non publiées). Avec notre protocole, l'analyse de plus de 1661 souris ont montré que l'ordre séquentiel de la souris testées dans une cage n'affecte pas significativement le temps de séjour bras ouvert (données non publiées). Autrement dit, les performances de la souris premières mesures prises à partir de la cage ne diffèrent pas significativement de ceux de la seconde, la troisième ou la souris dernière.

Bien que le test du labyrinthe surélevé et le test de la transition jour / nuit sont tous deux utilisés pour évaluer l'anxiété comme le comportement, les résultats ne sont pas toujours compatibles entre eux (Holmes et al, 2000; Tujimura et al, 2008; Nakajima et al, sous presse ) Par exemple, prosencéphale spécifiques calcineurine-souris knockout passer une diminution de la quantité de temps dans la chambre de la lumière dans le test de la transition jour / nuit, mais une quantité accrue de temps dans les bras ouverts dans le test du labyrinthe en plus élevées (Miyakawa et al. , 2003). L'analyse factorielle de notre batterie de tests comportementaux indique que le test du labyrinthe surélevé et le test de la transition jour / nuit d'évaluer les différents aspects de l'anxiété comme le comportement, tels que l'anxiété de l'espace lumineux dans le test de transition jour / nuit et les open-space, comme l'anxiété comportement dans le test en plein champ (Takao et Miyakawa, 2006b; Yamasaki et al, 2006). En conséquence, à la fois le test de transition jour / nuit et le test du labyrinthe surélevé sont inclus dans notre batterie de tests comportementaux.

Crabbe et ses collègues ont rapporté que des variables non contrôlées et des expériences qui caractérisent les mutants peuvent donner des résultats qui sont spécifiques à un laboratoire particulier (Crabbe et coll., 1999). Les différences de procédure qui existent entre les laboratoires, il est difficile de reproduire ou de comparer les résultats entre eux. Etablir la documentation visuelle du protocole favorisera une meilleure compréhension des procédures expérimentales, permettant la normalisation des protocoles utilisés dans les laboratoires et pour la comparaison des phénotypes comportementaux des différentes souches de souris mutantes évaluée à l'aide de ces tests. Nous avions déjà publié un protocole de cinéma de l'épreuve de transition jour / nuit (Takao et Miyakawa, 2006a). De même, les films d'autres protocoles, tels que pour l'essai en plein champ, le test de natation forcée Porsolt, et des tests de conditionnement de la peur que nous utilisons dans notre batterie de tests comportementaux sont actuellement en cours pour la publication en tant que futurs articles de revue vidéo.