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Triagem Estratégica e Caracterização do Complexo de Sinalização de Proteínas Visuais GPCR-mini-G para cristalização bem sucedida
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Strategic Screening and Characterization of the Visual GPCR-mini-G Protein Signaling Complex for Successful Crystallization

Triagem Estratégica e Caracterização do Complexo de Sinalização de Proteínas Visuais GPCR-mini-G para cristalização bem sucedida

DOI:
10.3791/60747-v

•

09:19 min

•

March 16, 2020

•

, , , , , ,
1Laboratory of Biomolecular Research,Paul Scherrer Institute, 2Department of Biology,ETH Zürich, 3Center for Radiopharmaceutical Sciences,Paul Scherrer Institute, 4Laboratory of Molecular Biology,Medical Research Council

Kapitel

  • 00:04Introduction
  • 00:45Cell Membrane Solubilization and Protein Extraction
  • 03:53UV-VIS Spectroscopy
  • 04:33Automated Size-Exclusion Chromatography of Rhodopsin and Rhodopsin Mini-Go Complex
  • 06:04Deglycosylation
  • 06:44Results: UV-VIS Spectroscopy, SEC, and SDS-PAGE
  • 08:34Conclusion

Summary

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Este relatório descreve a triagem de diferentes detergentes para a preparação do GPCR visual, a rodopsina e seu complexo com mini-Go. São demonstrados métodos bioquímicos caracterizando a qualidade do complexo em diferentes estágios durante a purificação. Este protocolo pode ser generalizado para outros complexos proteicos de membrana para seus futuros estudos estruturais.

Tags

Keywords: GPCRMini-G ProteinSignal TransductionMembrane Protein ComplexDetergent ScreeningCrystallizationHEK293 CellsAffinity Purification9-cis RetinalBuffer Exchange

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