Zum Anzeigen dieser Inhalte ist ein JoVE-Abonnement erforderlich. Melden Sie sich an oder starten Sie Ihre kostenlose Testversion.
Discrimintion et cartographie des transcriptions primaires et traitées dans la mitochondndrion de maïs à l'aide d'une stratégie circulaire basée sur rt-PCR
Kapitel
- 00:04Titel
- 00:39Preparation of Crude Mitochondrion from Maize Developing Kernels
- 01:45RNA 5’ Polyphosphatase Treatment and Circularization
- 02:33Reverse Transcription and Normalization
- 03:30PCR Amplification and Determination of Transcript Termini
- 04:34Verification of the cRT-PCR Mapping Results by RNA Gel Blot Hybridization
- 05:00Discrimination of Primary and Processed 5’ Ends
- 05:26Determination of Maize mRNA Termini Using the Circular RT-PCR-based Strategy
- 07:05Conclusion
Nous présentons une stratégie circulaire basée sur RT-PCR en combinant la RT-PCR circulaire, la RT-PCR quantitative, le traitement polyphosphatase d'ARN 5' et la tache nordique. Ce protocole comprend une étape de normalisation pour minimiser l'influence du triphosphate instable de 5' et il convient de discriminer et de cartographier les transcriptions primaires et traitées accumulées de façon stable dans la mitochondrie du maïs.
