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哺乳類細胞におけるCRISPRベースの遺伝子スクリーンのプール

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Genetik

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Pooled CRISPR-Based Genetic Screens in Mammalian Cells

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哺乳類細胞におけるCRISPRベースの遺伝子スクリーンのプール

DOI:

10.3791/59780-v

•

00:09 min

•

September 04, 2019

•

Katherine Chan*¹, Amy Hin Yan Tong*¹, Kevin R Brown, Patricia Mero, Jason Moffat^2,3

¹Donnelly Centre,University of Toronto, ²Department of Molecular Genetics,University of Toronto, ³Institute for Biomaterials and Biomedical Engineering,University of Toronto

Kapitel

00:04Titel
01:36Pooled CRISPR sgRNA Lentiviral Library Plasmid Amplification
02:24Large-scale CRISPR sgRNA Library Lentivirus Production
03:47Primary Screen Infection, Selection, and Cell Passaging
05:41CRISPR Sample Preparation and Sequencing
06:43Results: Genome-scale CRISPR Screening
07:54Conclusion

Summary

Automatische Übersetzung

CRISPR-Cas9技術は、あらゆる細胞型の哺乳類ゲノムを正確に編集する効率的な方法を提供し、ゲノム全体の遺伝スクリーンを実行する新しい手段を表します。プールされたゲノム全体のCRISPR-Cas9スクリーンのパフォーマンスを成功させるには必要な手順を説明する詳細なプロトコルをここで提供します。

Tags

CRISPR Genetic Screens Mammalian Cells Drop-out Screens Guide Libraries Essential Genes Cancer Drug Mechanisms Cell Lines Lentivirus Antibiotic Selection Plasmid Transformation Electrocompetent Cells LB Carbenicillin Plasmid Purification 293T Cells Transfection

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